INVESTIGATION OF BOVINE HERPESVIRUS TYPE -1- (BHV-1) ANTIBODIES IN SYRIAN CATTLE

INVESTIGATION OF BOVINE HERPESVIRUS TYPE -1- (BHV-1) ANTIBODIES IN SYRIAN CATTLE

S.Y. AL-BAROODI , A. KURDI , and A. ALOMAR

Dept. of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, Al-Baath University, SyriaArabRepublic.

 __________________________________________________________________________________________

                                                    ABSTRACT

__________________________________________________________________________________________

_________________________________________________________________________________

Key Words: Bovine herpesvirus-1-Enzyme Linked Immunosorbent Assay-Competitive –serum Neutralization test-Immunoglobulin IgM-Immunoglobulin IgG-Acute infection-Chronic infection.

____________________________________________________________________________________________       

التقصي عن أضداد الفيروس الحلئي البقري النمط -1- في الأبقار في سوريا

صفوان يوسف البارودي , عزام کردي , أنور العمر

تم جمع (230 ), عينة مصل من 11 محطة للأبقار بهدف التقصي عن أضداد الفيروس الحلئي البقري النمط-1- وتحديد نسبة الإصابة وعلاقتها بالعمر والجنس وذلک باستخدام اختباري المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم – التنافسي واختبار التعادل المصلي , تبين من خلال النتائج أن نسبة الإصابة الإجمالية في سوريا کانت (45.21%) بالمقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم فيما کانت اقل من ذلک باستخدام التعادل المصلي (36.09%) أظهرت النتائج أن أعلى نسبة إصابة کانت في محطة جب رملة (60%) فيما سجلت اقل نسبة إصابة في محطة الزربة (30%) لکلا الاختبارين , لوحظ من خلال النتائج أن أعلى نسبة إصابة حادة کانت في الأعمار الأقل من ستة شهور لکلا الجنسين , فيما کانت أعلى إصابة مزمنة في الإناث التي تراوحت أعمارها اکبر من سنتين وحتى 4 سنوات فيما لم تسجل أي إصابة مزمنة في العجول صغيرة العمر ولکلا الجنسين , أشارت نتائج الفحص المصلي لمحطات الأبقار أن أعلى نسبة إصابة حادة کانت لمحطة أبقار جورين فيما سجلت محطة أبقار جب رملة أعلى نسبة إصابة مزمنة. ومن خلال المقارنة بين الاختبارين المستخدمين في الدراسة تبين أن أعلى نسبة إصابة کانت لاختبار المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم , في حين کانت نسب الإصابة باستخدام اختبار التعادل المصلي اقل من ذلک. تبين من خلال الدراسة أن أعلى نسبة إصابة في الأبقار التي أجهضت في الثلث الثاني من الحمل مقارنة بمجاميع أجهضت في الثلث الأول والثالث, بينما کانت نسب الإصابة في الأبقار التي تعاني من الإجهاض أعلى من التي تعاني من مشاکل تناسلية أخرى. لوحظ من خلال دراسة العلاقة ما بين نسبة الإصابة بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- بالأعراض المرضية الظاهرة على الحيوانات أن أعلى نسبة إصابة کانت في الحيوانات التي عانت من مشاکل تنفسية , بينما سجلت اقل نسبة إصابة في الحيوانات التي کانت سليمة ظاهريا ومن دون وجود فروق_" معنوية إحصائيا.

INTRODUCTION

المقدمــة

يعد الفيروس الحلئي ألبقري النمط -1 - Bovine herpesvirus-1-(BoHV 1,BHV 1) احد الفيروسات الحلئية Herpesviruses والتي تعود إلى عائلة الفيروسات الحلئية Herpesviridae والى الجنس Varicellovirus  ينتشر هذا الفيروس في أنحاء کثيرة من بلدان العالم ولأهميته من الناحية البيطرية صنف ضمن اللائحة B لمنظمة الصحة العالمية World Organization Animal Health (OIE) لذلک اتخذت الکثير من بلدان العالم نظم سيطرة وقضاء Eradication للتخلص منه (Gonzalez-Garcia et al., 2009).

يسبب الفيروس أمراضا عديدة في الأبقار منها : التهاب القصبات والرغامي الخمجي ألبقري Infectious Bovine Rhinotrachitis (IBR) والتهاب الفرج والمهبـل البثري الخمجي في الإناث Infectious Pustular Vulvovaginitis (IPV) والتهاب الحشفة والقضيب البثري الخمجي في الثيران Infectious Pustular Balanopsthitis(IPB) فضلا عن الأعراض الجهازية ألأخرى (Benoit et al., 2007) للمرض خصائص معدية کثيرة تسبب خسائر اقتصادية فادحة إلا أن احد أهم الخصائص الوبائية لهذا الفيروس هو قدرته على إحداث الإصابة الکامنة Latent Infection في النهايات العصبية Terminal Ganglia بعد الإصابة الأولية , حيث أن الحيوانات التي تحدث فيها إصابة کامنة تبقى طيلة حياتها حاملة للفيروس وطارحة له , ترتفع کمية الفيروس المطروح من قبل الحيوانات المصابة بعد إعادة تنشيط الإصابة الکامنة Reactivation وذلک لأسباب عديدة منها : إجهاد النقل , التحصين, الولادة , إعطاء بعض العقاقير منها الستيرودات القشرية Corticosteroids  (Clinton and Shafiqul, 2008).

ينتقل الفيـروس عادة عن طريق الرذاذ الملـوث بالفيـروس مـن الحيوانات المصابة فضلا عن الماء والعلف الملوثيـن بالسيلانـات التنفسيـة أو المهبليـة وينتقل کذلک عـن طريق التلقيـح الطبيعي أو عـن طريق السائـل المنوي الملوث بالفيـروس والمستخـدم في التلقيح الاصطناعي فضـلا عن نقل الأجنة (Deka etal., 2005) يتکاثر الفيروس بعد دخوله للجسم خلال فترة حضانة تبلغ 3-5 أيام في أنسجة البطانة المخاطية للجهاز التنفسي أو التناسلي ومن ثم تبدأ مرحلة انتشار الفيروس في الدم Viremia إلى بقية أعضاء الجسم حيث تبدأ بعدها مرحلة ظهور الأعراض المرضية , يتمرکز بعدها الفيروس في الجهاز العصبي المحيطي في العقيدات العصبية وکذلک في الأنسجة المخاطية لتبدأ بعدها مرحلة الکمون وفي حال توافر الظروف الملائمة تعاد عملية إعادة تنشيط الإصابة (Ezzi et al., 2011).

ولأهمية الفيروس من الناحية الاقتصادية فقد بدأت الکثير من الدول نظاما للسيطرة عليه وأخذت تتبع برامج للتشخيص ومـن ثـم السيطرة واستبعـاد الحيوانـات المصابـة وذلک مـن خلال إتباعها نظـام للتفريــق مـا بين الإصابـة والتلقيح Differentiating Infection from Vaccinated (DIVA) Individual وأخذت تطور أنواعا من اللقاحات للتخلص من مشکلـة التأشب Recombination (Maria et al., 2011), إن نظام التفريق ما بين الإصابة والتلقيح يعتمد في التشخيص على عدة معايير واختبارات حيث کان الهدف منه هو السيطرة وانتقاء الحيوانات المصابة لغرض استبعادها واختيار الاختبار الأمثل في ذلک فضلا عن الهدف الاقتصادي الأسمى وهو تصدير حيوانات خالية من المرض , حيث اعتمدت في ذلک اختبارات عديدة لغرض المقارنة في کفاءتها ودقتها واعتماد الأفضل منها في التقصي عن الأضداد الناجمة عن الإصابة وتفريقها عن الأضداد الناجمة عن التلقيح حيث استخدم في ذلک تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من النوع التنافسي Competitive ELISA باستخدام البروتينات السکرية Glycoprotein کمستضد مرجعي وبأنواع عديدة منها (gB,gE,gC) واختبار التعادل المصلي Neutralization test(NT) وتقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من النوع الغير مباشر Indirect ELISA واختبار حلقة الحليب Ring test المعتمد من قبل Scientific Veterinary Committee Group Organized(Julien et al., 2006).

لذلک تمت هذه الدراسة نظرا لعدم وجود دراسة تتناول نسبة الإصابة في محطات الأبقار في سوريا حيث کانت تهدف إلى: البرهان عن الأضداد النوعية للفيروس لکلا النمطين (IgM ,IgG ) باستخدام اختبار المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من النوع التنافسي Competitive ELISA في کلا الجنسين وبمختلف الأعمار ومقارنة حساسيته باختبار التعادل المصلي.

MATERIALS and METHODS

المواد وطرائق البحث

1-الحيوانات Animals :

   تمت زيارة 11محطة للأبقار التابعة لوزارة الزراعة –المؤسسة العامة للمباقر حيث شملت ( جب رمله, جورين , حمص , فيديو , طرطوس , درعا , الغوطة , الزربة , مسکنة , تل تمر , دير الزور ) تم عمل استمارة فحص سريري لکل زيارة لهذه المحطات لغرض جمع البيانات التالية عن الحيوان حيث شملت ( عمر الحيوان , الجنس , وجود إجهاض , وقت حدوث الإجهاض , نوع الإجهاض , وجود علامات مرضية  ( تنفسية , عينية , تناسلية , عصبية , هضمية , التهاب ضرع , إصابات مزدوجة بأکثر من عرض سريري أو کون الحيوان سليم ظاهريا ) .

2-جمع العيناتSample collection :

  تم جمع 230 عينة دم من وريد الذيل حيث تم وضعها في أنابيب زجاجية معقمة مفرغة من الهواء ومن ثم وضعت الأنابيب في حافظة خاصة لنقل العينات مبردة ونقلت بعد ذلک إلى مخبر الجراثيم –قسم الأحياء الدقيقة-کلية الطب البيطري-جامعة البعث , ثفل الدم في جهاز المنبذة 3500 دورة/ دقيقة لمدة 10 دقائق , ثم فصل المصل عن الخثرة ووضع في أنابيب ابندروف لحفظ المصل ومن ثم علمت حسب رقم الحيوان واسم المحطة وحفظت  عند الدرجة -30 م ه لحين إجراء الاختبارات المصلية عليها. (Rai,2005).

3- الاختبارات المصلية :Serological tests

أولا: تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالأنزيم من النوع التنافسي غير المباشر

 In-Direct Competitive Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay (CI-ELISA) تم استخدام عتيدة هذا الاختبار العائدة لشرکة Labor Diagnostik Leipzig الألمانية لغرض التقصي عن الغلوبيولينات المناعية بنوعيها وکالاتي :

- الکواشف والمحاليل الکيميائية والمواد المستخدمة:

* الصفيحات الدقيقة Micro Plates  والتي تکون حاوية على 12 شريط وکل شريط يکون حاويا على 8 حفر , تکون هذه الحفر مطلية بالفيروس الحلئي ألبقري النمط-1- المضعف.

* محلول الغسيل Wash Solution  بترکيز(10X) والذي يکون حاويا على مواد حافظة و مادة التوين Tween.

* دارئة تخفيف المصل Serum Diluents Buffer والذي يستخدم لتخفيف المصل حيث يکون حاويا على مواد حافظة ومادة توين Tween.

* الشاهد الايجابي Positive Control حيث يکون حاويا على مصل بقري ايجابي للفيروس الحلئي ألبقري النمط-1- في درائة حاوية على بروتينات مثبتة ومواد حافظة.

* الشاهد السلبي Negative Control حيث يکون حاويا على مصل بقري سلبي للفيروس الحلئي ألبقري النمط-1- في درائة حاوية على بروتينات مثبتة ومواد حافظة.

* المقترنAnti-gB-HRP Conjugate  حيث يکون مکونا من أضداد نوعية لأضداد البروتينات السکرية نوع gB  للفيروس الحلئي ألبقري النمط-1- والمرتبطة بأنزيم البيروکسيديز فضلا عن أضداد أحادية النسيلة للفيروس الحلئي ألبقري النمط-1- والتي تکون ضمن دارئة حاوية على بروتينات مثبتة ومواد حافظة.

* محلول الرکيزة Substrate  ((TMB (Tetramethylbenzidine)

* محلول إيقاف التفاعل Stop solution  عبارة عن حامض الفسفوريک .

تحضير المواد اللازمة لإجراء الاختبار:

* تحضير محلول الغسيل : يجب تمديد محلول الغسيل في الماء المقطر بنسبة1:10 حيث أن تحضير محلول غسيل لصفيحة واحدة يلزم إضافة 50 مليلتر من محلول الغسيل (10X) إلى 450 مليلتر ماء مقطر يمزج جيدا ويحفظ في 4 م ە.

* يجب إذابة المصل المحفوظ في درجات حرارة منخفضة قبل إجراء الاختبار.

- إجراء الاختبارTest Procedure

*تم إجراء الاختبار حسب تعليمات الشرکة المصنعة ضمن الکتيب الخاص بالاختبار.

*قبل إجراء الاختبار يجب وضع العتيدة في درجة حرارة الغرفة قبل ساعة من بدء الاختبار.

*تم إضافة 50 مايکروليتر من دارئة تخفيف المصل لجميع حفر الصفيحة الدقيقة.

*تم إضافة 50 مايکروليتر من الشاهد السلبي والايجابي بشکل مضاعف في الحفر A1,B1,C1,D1 .

*تم إضافة 50 مايکروليتر من المصل بشکل مضاعف في الحفر يجب الانتباه برج الصفيحة.

*تم تحضين الصفيحة الدقيقة لمدة 12-18 ساعة (Over night ) 18-25  م ە.

* يتم التخلص من المصل ومن ثم تغسل صفيحة الاختبار باستخدام محلول الغسيل بإضافة 300 مايکروليترفي کل حفرة وترج الصفيحة ومن ثم يتخلص من محلول الغسيل وتعاد هذه العملية ثلاث مرات .*يضاف 100 مايکروليتر من المقترن لجميع حفر الاختبار .

*تحضن صفيحة الاختبار 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة .

* تم التخلص من المقترن ومن ثم تغسل صفيحة الاختبار باستخدام محلول الغسيل بإضافة 300 مايکروليتر في کل حفرة وترج الصفيحة ومن ثم يتخلص من محلول الغسيل وتعاد هذه العملية ثلاث مرات .

*تم إضافة 100 مايکروليتر من محلول الرکيزة لجميع حفر الاختبار .

*تحضن صفيحة الاختبار 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة ويراعى أن يکون التحضين في مکان مظلم

*تم إضافة 100 مايکروليتر من محلول إيقاف التفاعل .

*تمت قراءة النتيجة خلال 20 دقيقة في جهاز قارئ صفائح تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من نوعELX 800 –Bio-Tek Instruments .Inc  عند طول موجي 450 نانوميتر سجلت القراءات المتمثلة بالکثافة الضوئية Optical Density (OD) .

حساب النتائج Calculation

* تم حساب متوسط الشاهد السلبي والايجابي لکل واحد منهما على حده بجمع الکثافة الضوئية لکل واحد منهما وتقسيمها على عدد الحفر لهما.

* تم حساب متوسط قراءة العينات لکل عينة على حده بجمع الکثافة الضوئية لکل عينة وتقسيمها على عدد الحفر لها.

  تم حساب نسبة التثبيط Blocking  باستخدام المعادلة التالية:

  نسبة التثبيط = متوسط الشاهد السلبي – متوسط العينة    × 100

                                  متوسط الشاهد السلبي

تقييم النتائج :

• في حال کانت نسبة التثبيط اقل من 55 % فان النتيجة سالبة .
• في حال کانت نسبة التثبيط اکبر أو يساوي 55 % واقل من 65% فان النتيجة مشکوک فيها والأفضل إعادة فحص مصل الحيوان.
• في حال کانت نسبة التثبيط اکبر أو يساوي 65 % فان النتيجة موجبة .

ثانيا: اختبار التعادل المصلي Serum Neutralization(SN):

تم إجراء هذا الاختبار حسب طريقة (Amira et al.,2006)وکالاتي:

- يتم تحضين مصول الحيوانات المراد فحصها في الحمام المائي 56  م ە  لمدة 30 دقيقة لإبطال فعالية المتمم.

- يتم تمديد المصل عشاريا في أنابيب لعشرة تخافيف .

- يتم اخذ 25مايکروليترمن المصل لکل تخفيف ووضعه في أنابيب صغيرة ومعقمة ومن ثم يضاف إليه 25مايکروليتر من الفيروس الحلئي ألبقري النمط-1- العترة الهنغارية اللقاحيـة والمنتجـة من قبل مختبرات الصحـة الحيوانيـة في دمشق عـند معيار(100 TCID50/25ul) يمزجـان جيدا ويحضـن لمدة ساعة 37 م ە.

- يتم تحضير خلايا زرع نسجي من نوع خلايا کلية الأبقار Madin Darby bovine kidney cells في الصفيحات الدقيقة ذوات 96 حفرة حيث يتم إضافة 100مايکروليتر من الخلايا لکل حفرة.

- يتم إضافة 50 مايکروليتر من المصل والفيروس الممزوجين إلى الخلايا ويحضن طبق الاختبار في 37 م  ە (Co2 5%) وتفحص يوميا لمدة 7 أيام لمشاهدة الأثر المرضي للخلايا CPE.

- يتم احتساب النتيجة في العينات التي أظهرت أکثر من 50% تأثيرا مرضيا للخلايا إذ تعتبر النتيجة ايجابية.

4- التحليل الإحصائي: تم استخدام اختبار Z  ضمن برنامج Sigma state لتحليل النتائج إحصائيا.

RESULTS

النتائج

بينت نتائج الفحص المصلي للفيروس الحلئي البقري النمط-1- لمحطات الأبقار الحلوب في سوريا باستخدام تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من النوع التنافسي واختبار التعادل المصلي , أن معدل الإصابة العامة في سوريا 45.21% باستخدام تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم في حين بلغ معدلها 36.09% باستخدام التعادل المصلي , وجد کذلک أن أعلى معدل إصابة کان في محطة أبقار جب رملة ولکلا الاختبارين, بينما بلغ اقل معدل إصابة لمحطة الزربة ولکلا الاختبارين أيضا , علما بان معدل الإصابة بين المحطات وبين الاختبارات بين وجود فروق معنوية بين المحطات ولکلا الاختبارين, وکما هو مبين في الشکل -1-.

الشکل 1: يبين نسبة الإصابة العامة لمحطات الأبقار في سوريا بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- باستخدام تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من النوع التنافسي غير المباشر CI-ELISA واختبار التعادل المصلي Serum Neutralization(SN)

ومن خلال فحص الأمصال للکشف عن علاقة العمر بنوع الإصابة سواء کانت حادة أو مزمنة , تبين من خلال النتائج وجود أعلى إصابة حادة في کلا الجنسين التي بلغت أعمارها اقل من 6 شهور , بينما بلغ اقل معدل إصابة حادة في الذکور التي بلغت أعمارها اکبر من سنتين , في حين کانت اقل إصابة حادة في الإناث التي زادت أعمارها على7 سنوات , في حين بلغت أعلى إصابة مزمنة في الذکور التي بلغت أعمارها اکبر من سنتين , والإناث التي بلغت أعمارها (2<-4 سنوات) , أما اقل معدل إصابة مزمنة فکانت في الأعمار التي بلغت اقل من 6 شهور ولکلا الجنسين مع وجود فروق معنوية, وکما هو موضح في الجدول-1-.

جدول 1: يبين علاقة العمر والجنس بنسبة الإصابة ونوعها بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- باستخدام تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من النوع التنافسي غير المباشر

تبين من خلال فحص أمصال الحيوانات في محطات الأبقار التي استخدمت في الدراسة أن أعلى معدل إصابة حادة کانت في محطة أبقار جورين بينما بلغ اقل معدل إصابة حادة لمحطة أبقار الغوطة, بينما أوضحت نتائج الإصابة المزمنة وجود أعلى معدل لمحطة أبقار جب رملة , بينما سجل اقل معدل إصابة مزمنة في محطتي أبقار حمص ودرعا من غير وجود فروق معنوية, وکما مبين في شکل-2-.

شکل 2: يبين نسبة الإصابة بالفيروس الحلئي البقري النمط-1-  بنوعيها في محطات الأبقار في سوريا

وللمقارنة ما بين اختباري المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم التنافسي واختبار التعادل المصلي للفئات العمرية لکلا الجنسين في محطات الأبقار , بينت النتائج وجود أعلى معدل إصابة للفئة العمرية ( 6 شهور-2 سنة) لکلا الجنسين ،  إحصائياً تبين وجود فروق معنوية بين الاختبارين لجميع الفئات العمرية , وکما هو موضح في الجدول-2-.

جدول 2: يبين علاقة العمر والجنس بنسبة الإصابة ونوعها بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- باستخدام تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم من النوع التنافسي غير المباشر واختبار التعادل المصلي

بينت نتائج الفحص المصلي للفيروس الحلئي البقري النمط-1- في الإناث التي تعاني من مشاکل تناسلية (فترة الإجهاض, نوع الإجهاض) إن أعلى معدل کان في الأبقار التي تعاني من حصول إجهاض في الثلث الثاني من الحمل ومن دون فروق معنوية مقارنة" مع الأبقار التي أجهضت في الثلث الأول , وکذلک بين الأبقار التي أجهضت في الثلثين الثاني والثالث من الحمل, وکما موضح في الجدول-3-.

فيما أظهرت نتائج الفحص المصلي لنفس الأبقار من ناحية نوع الإجهاض وجود أعلى معدل إصابة بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- في الأبقار التي تعاني من حصول إجهاض وبالمقارنة الإحصائية مع المجموعتين الاخريتين تبين وجود فرق معنوي بينهم وکما هو موضح في جدول-3-.

جدول 3: يبين علاقة نسبة الإصابة بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- بفترة الإجهاض ونوعه

بينت نتائج الفحص المصلي للحيوانات التي تعاني من أعراضا سريريه متباينة وجود أعلى معدل إصابة في الأبقار التي تعاني من أعراض تنفسية  ( 36.67% ) بينما بلغت اقل نسبة اصابة في الحيوانات التي عانت من اعراض هضمية (22.22% ) وکما هو موضح في الجدول-4-.

جدول 4: يبين علاقة نسبة الإصابة بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- بالأعراض المرضية الظاهرة على الحيوانات

DISCUSSION

المناقشة

يعد الفيروس الحلئي البقري من اخطر الفيروسات التي تهدد الثروة الحيوانية في العديد من دول العالم نظرا لتسببه بتأثيرات عدة على هذه الصناعة , لذلک اعتمدت العديد من البلدان نظم دورية للکشف عنه في قطعانها للحد من انتشاره والسيطرة عليه (Boelaert et al., 2005), تم خلال هذه الدراسة استخدام نوعين من الاختبارات المصلية للکشف عن الأضداد النوعية للفيروس الحلئي البقري النمط-1- في مصول 230 حيوانا ولکلا الجنسين وبأعمار مختلفة متمثلة باختبار المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم – التنافسي واختبار التعادل المصلي , تبين من خلال النتائج أن نسبة الإصابة الإجمالية للفيروس الحلئي البقري النمط-1- في سوريا بلغ 45.21% بالمقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم في حين بلغت النسبة 36.09% باستخدام اختبار التعادل المصلي , توجد دراسة واحدة في سوريا (Alomar and AlYasino, 2010) تم من خلالها الکشف عن أضداد الفيروس الحلئي البقري النمط-1- في خمسة محطات في سوريا حيث بلغت نسبة الإصابة الإجمالية وباستخدام المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم (10-21%) , إن سبب هذا الاختلاف يعود لعدة أسباب منها الاختلاف في عدد محطات الأبقار المشمولة لکل دراسة , التباين في حساسية الاختبار حسب نوعه , أن الفيروس الحلئي البقري يمتلک خاصية إعادة التنشيط Re activation  بعد مرحلة الکمون Latency والتي يمکن أن تظهر بشکل اندلاعات مرضية بين الحين والأخر مسببة ارتفاع في نسب الإصابة الإجمالية إضافة لذلک فان استهدافنا لجمع العينات من أبقار تظهر عليها أعراضا مرضية يزيد من نسب الکشف عن الإصابة إضافة إلى أن اختبار المقايسة المناعية المرتبط بالإنزيم من النوع التنافسي والذي يکشف عن الأضداد النوعية للبروتينات السکرية نوع gB للفيروس الحلئي البقري النمط-1- والمستخدم قيد دراستنا , يعتبر ذو حساسية عالية , خصوصية عالية للکشف عن الأضداد بالمقارنة مع الأنواع الأخرى (De Wit et al., 1998) لهذا الاختبار ,بينت نتائج الاختبارات المصلية للکشف عن نسب الإصابة في محطات الأبقار أن أعلى نسبة إصابة کان لمحطة أبقار جب رملة ولکلا الاختبارين , في حين کانت اقل نسبة إصابة في محطة الزربة , أن هذا التباين في نسب الإصابة بين المحطات يعود لعدة أسباب منها کثافة التربية , حجم القطيع , الطبيعة الجغرافية لکل منطقة , أسلوب التربية , طبيعة حرکة الحيوانات وتنقلاتها بين محطة وأخرى , دخول حيوانات جديدة لمحطة معينة واستخدام اللقاحات التحصينية ضد الفيروس لبعض المحطات دون الأخرى , إن سبب التباين في نسب الإصابة ما بين الاختبارين المصليين المستخدمين في الدراسة يعود لاختلاف درجة الحساسية لکل منهما عن الأخر إضافة إلى الاختلاف في درجة تمديد المصل حيث تکون عالية باختبار التعادل المصلي مقارنة بالمقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم وهذه النتيجة تشابه مع ما ذکره (Serpil, 2005) حيث استخدم عدة اختبارات مصلية للکشف عن أضداد الفيروس الحلئي البقري النمط-1- وکان الاختبار الأدق وذو الحساسية العالية تقنية المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم –التنافسي والمتخصص للبروتينات السکرية من نوع gB  بالمقارنة مع الاختبارات الأخرى .

أما نتائج التقصي عن نسبة الإصابة الحادة مقارنة بعمر الحيوان فأظهرت النتائج إن أعلى نسبة للإصابة الحادة کانت في العجول الأقل من 6 شهور ولکلا الجنسين في حين لم تسجل في الإناث التي کانت أعمارها اکبر من 7 سنوات أي نسبة إصابة , إن سبب هذا التباين يعود إلى أن الإصابة الحادة والمتمثلة بالغلوبيولين المناعي IgM  يکون واضحا وبمعايير ايجابية بعد الاستجابة المناعية الناجمة عن الإصابة الأولية بالفيروس إضافة إلى أن الحيوانات صغيرة العمر تکون معرضة للإصابة وحساسة لها مقارنة بالکبيرة منها ,إن الغلوبيولين المناعي IgM يقل معدل احتمالية ظهوره بعد طور الکمون Latency أثناء إعادة تنشيط الإصابةRe-Activation  , حيث ذکر(Mylene et al., 2000) إن الغلوبيولين المناعي IgM يمکن أن يظهر بعد إعادة التنشيط بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- ولکن بنسب متباينة اعتمادا على الذرية المسببة للمرض , الجرعة الفيروسية التي تعرض لها الحيوان أثناء الإصابة , طريقة دخول الفيروس لجسم الحيوان, فترة حضانة الفيروس وتأثر هذه العملية بإعطاء الحيوان للستيرودات القشرية , في حين بين آخرون (Madic et al., 1995) إن الفيروس الحلئي البقري النمط-1- يطرح لمدة 21 يوما في العجول المصابة تجريبيا بالرغم من وجود أضداد واردة من الأم وبمعايير ايجابية , بينما قام (Mars et al., 2000) بإعطاء عجول مصابة أضداد نوعية للفيروس وأظهرت النتائج عدم تأثر المعايير الفيروسية بذلک. أما الإصابة المزمنة فکان أعلى معدل لها في الفئة العمرية اکبر من سنتين إلى 4 سنوات في الإناث وللفئة العمرية 6 شهور-2سنة  للذکور فيما انعدمت في الأعمار الصغيرة لکلا الجنسين , وفسرت هذه النتيجة إلى أن تقدم الحيوانات بالعمر يزيد من فرصة الإصابة بالفيروس , وان معايير الغلوبيولين المناعي IgG تکون ذات معايير عالية بعد إعادة التنشيط وبغض النظر عن کمية الفيروس المطروحة من قبل جسم الحيوان (Daniela et al., 2006) إن سبب کون نسبة الإصابة المزمنة في الإناث أعلى مما هو عليه في الذکور , لکون الذکور تستخدم غالبا للتسمين بعد عمر الفطام , ويستبعد دائما الضعيف منها أو تلک التي تتعرض لانتکاسات مرضية متکررة , في حين أن الإناث تربى لأعمار کبيرة مما يزيد من فرصة الإصابة بالفيروس إضافة إلى فرصة تعرضها لأطوار الکمون وإعادة تنشيط ولمرات عديدة والتي تکون مترافقة مع عوامل عديدة من أهمها في الإناث هي حصول الحمل والولادة, وهذا يتفق على ما ذکره (Eiras et al.  (2009 حيث بين أن نسبة الإصابة المزمنة تزداد بزيادة عمر الحيوان بالمقارنة بنسب الإصابة في الإناث صغيرة العمر.

بينت نتائج الفحص المصلي لمحطات الأبقار المستخدمة قيد الدراسة وجود أعلى نسبة إصابة حادة في محطة جورين (36.37%) في حين بلغت أعلى نسبة إصابة مزمنة لمحطة أبقار جب رملة (40%) إن سبب هذا التباين ما بين محطات الأبقار يعود لأسباب عديدة منها: إن فترة الکمون والتي تکون شائعة للفيروس الحلئي البقري النمط-1- تعطي صورة غير دقيقة لنسب الإصابة في قطعان الأبقار إضافة إلى حقيقة علمية ذکرت من قبل (Abu Elzein et al., 2008) أن وجود حيوان واحد مصاب في قطيع بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- يعطي مؤشرا لوجود نسب إصابة أعلى مما هو مبين ضمن الاختبار المصلي المستخدم نظرا لمرور الإصابة بمراحل عديدة , وان الحيوان الذي يتعرض للإصابة يبقى حاملا لها طيلة حياته بالرغم من إعطاء الکثير من الحيوانات نتيجة سالبة لوجود الأضداد في أمصالها.

ومن خلال مقارنة نسب الإصابة باستخدام اختباري المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم واختبار التعادل المصلي , تبين أن نسب الإصابة باختبار المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم أعلى مما هو عليه باختبار التعادل المصلي , وان نسب الإصابة تقل بازدياد عمر الحيوان إلا أن أعلى نسب إصابة کانت في الفئة العمرية  6 شهور-2 سنة  ولکلا الجنسين, إن السبب في التباين ما بين الاختبارين يعود لعدة أسباب من أهمها , أن للمقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم –التنافسي خصائص تعطيها حساسية ودقة أعلى مما هو عليه بالتعادل المصلي منها: أن لها القدرة على الکشف عن الأضداد مهما کانت کميتها قليلة , الکشف عن الأضداد التي لها القدرة على التعادل إضافة للأضداد التي ليس لها القدرة على ذلک , في حين بين (Johannes et al. (2004  أن اختبار التعادل المصلي يتأثر بعوامل تسبب قراءات خاطئة منها استخدام لقاحات جرثومية أو فيروسية تنتج أضداد ضد بروتينات معينة ممکن أن تعطي نتائج ايجابية غير نوعية, إن نسب الإصابة التي قلت بازدياد عمر الحيوان تعود لأسباب عديدة منها: إن الإصابة الکامنة تحدث في الأعمار الکبيرة بنسب اکبر من الصغيرة منها حيث بين (Tolga et al. (2006 إن مصول الحيوانات في فترة الکمون تعطي نتائج سالبة للإصابة إضافة إلى ذلک ذکر (Kamaraj et al. (2009 أن الحيوان المصاب بتقدم العمر يکون مناعة ممکن أن تحد لدرجة ما من ظهور الإصابة بإعادة التنشيط مرة أخرى إضافة إلى ذلک فان الحالة المناعية للحيوانات الصغيرة العمر تسمح للفيروس بإحداث الإصابة مقارنة بالحيوانات کبيرة العمر.

أما علاقة نسبة الإصابة بفترة الإجهاض فبينت النتائج أن أعلى نسبة للإصابة کانت في الثلثين الثاني والأول من الحمل , إن سبب التباين في النسب يعود إلى أن جسم الأبقار الحوامل يکون استجابة مناعية بتقدم الحمل تمنع من حصول الإجهاض إضافة إلى أن الاستجابة المناعية للجنين ضد المسببات المرضية تکون في الثلث الأخير من الحمل مما قد يقلل فرص الإجهاض في هذه المرحلة (Nardelli et al., 2008) , أما علاقة نسب الإصابة بنوع  وفترة الإجهاض فبينت النتائج أن أعلى نسبة إصابة کانت في الأبقار التي تعاني من إجهاض مقارنة بالأبقار التي تعاني من ولادة عجول ميتة وأخرى بعجول ضعيفة , إن سبب هذا التباين يعود إلى أن الأبقار الحوامل عند إصابتها بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- يمکن أن يتسبب بموت أجنتها ويعود السبب في ذلک لعدة أسباب من احدها هو الاستجابة المناعية النوعية وغير النوعية حيث تتحطم خلايا المشيمة والجنين مما يؤدي إلى موت الجنين , إن طرح الجنين الميت من قبل جسم الأم إلى الخارج قد يستغرق وقتا مما قد يسمح لتحول الإصابة إلى حالة الکمون مما قد يعطي نسبة إصابة سلبية عالية مقارنة بباقي المجاميع (Hashemi et al., 2009) أما الأبقار التي عانت من ولادة عجول ضعيفة فان سبب انخفاض نسبة الإصابة فيها يعود إلى کون هذه الأبقار يمکن أن تکون قد عانت من إصابة أثناء فترة الحمل وکونت استجابة مناعية قد تکون غير کافية لإبقاء أجنتها سليمة مما قد يتسبب في تلف بعض الأنسجة مؤديا لإحداث ضعف في أجسامها أو في أنسجة المشيمة مما يؤدي إلى ولادة مبکرة لعجول قد يکون البعض منها مشوها (Winkler et al., 2000).

أما علاقة نسبة الإصابة بنوع الأعراض المرضية فبينت النتائج أن أعلى نسب إصابة کانت في الأبقار التي عانت من أعراضا تنفسية , إن سبب تباين نسب الإصابة بنوع الأعراض المرضية يعود لأسباب جمة من أهمها : إن الفيروس الحلئي البقري النمط-1- بالرغم من تصنيفه إلى ثلاثة مجاميع اعتمادا على العلامات المرضية إلا أن الذرية الواحدة تسبب أعراضا مختلفة بنفس الوقت کأن تکون( تنفسية وتناسلية , تنفسية وعينية , تنفسية وعصبية) (Tikko et al., 1995), لذلک فان نسب الإصابة کانت متباينة وغير معنوية .

إن انتشار الإصابة بالفيروس الحلئي البقري النمط-1- في محطات الأبقار في سوريا يعود لأسباب عديدة (مشاهدات حقلية) إن البکاکير يتم تلقيحها دائما عن طريق التلقيح الطبيعي بثيران (إما أن تکون من نفس القطيع أو قد تم جلبها من محطة أخرى) غير مفحوصة بأي اختبار للکشف عن هذا الفيروس مما قد يسهل لولادة جيل جديد مصاب بالفيروس في حال کان الثور مصابا , سهولة انتقال الأبقار بکافة الأعمار والأجناس بين المحطات دون دراسة مسبقة عن الإصابات المرضية التي تعاني منها , إن السائل المنوي المجمد والمستخدم من قبل محطات تربية الأبقار في التلقيح الاصطناعي خال من الفيروس الحلئي البقري النمط-1- ( بحث قيد النشر) إلا أنه من خلال المشاهدات الحقلية وجد أن الکثير من المحطات تعاني من تلوث معدات التلقيح الاصطناعي بروث وسيلانات الحيوانات حيث يساهم العامل البشري في نقل الإصابة , استخدام اللقاحات الحية المضعفة دون دراسة تأثيرها أو مساهمتها في التأشبRecombination  أو قدرتها على إحداث الکمون .

REFERNCES

المصادر

Abu Elzein, E.M.E.; Housawi, F.M.T.; Afaleq, A.I. and Musa, J. (2008): Emergence of clinical infectious bovine rhinotrachitis in Eastern  Saudi Arabia. Revue. Elev. Vet. Pays. Trop, 61(1): 11-13.

Alomar, Y. and AlYasino, Y. (2010): Epidemiological study on infectious bovine rhinotrachitis in cattle, International Journal Of Infectious Disease, 14: 32-40.

Amira, M.E.; Fadol, M.A.; Karrer, A.E. and Elhussin, A.R.M. (2006): IBR virus in Sudan:Epidemiological and Serological studies. Journal of Animal and Veterinary Advances, 5 (12): 1053-1057.

Benoit, M.; Julien, T.; Philippe, K.; Frederic, S. and Etienne, T. (2007): Bovine herpesvirus 1 infection and infectious bovine rhinotrachitis.Vet. Res., 38: 181-209.

Boelaert, F.; Speybroeck, N.; Kruif, A.D.; Aerts, M.; Burzykowski, T.; Molenberghs, G. and Berkvens, D.L. (2005): Risk factor for bovine  herpesvirus-1 seropositivity. Preventive Veterinary Medicine, 69: 285-295.

Clinton, J. and Shafiqul, C. (2008): A review of the biology of bovine herpesvirus type 1(BHV-1), its role as a cofactor in the bovine respiratory disease complex and development of improved Vaccines. Animal Health Research Reviews, 8(2): 187-205.

Daniela, B.; Ramona, M.; Virgillia, P. and Herman, V. (2006): Evaluation of  immune response against infectious bovine rhinotrachitis virus by Immunoenzymatic assay.Buletinul, 63: 1454-1460.

De Wit, J.J.; Hage, J.J.; Brinkhof, J. and Westenbrink, F. (1998): A comparative study of serological tests for use in the bovine herpesvirus 1 eradication programme in the Netherlands. Veterinary Microbiology,61:153-163.

Deka, D.; Ramneek, M.; Maiti, K. and Oberoi, M.S. (2005): Detection of bovine herpesvirus -1infection in breeding bull semen by virus isolation and polymerase chain reaction. Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz., 24(3):1085-1094.

Eiras, C.; Dieguez, F.J.; Sanjuan, M.L.; Yus, E. and Aranaiz, I. (2009): Prevalenc of serum antibodies to bovine herpesvirus -1 in cattle in Galicia  (NW Spain). Spanish Journal Of Agricutural Research, 7(4): 801-808.

  Ezzi, A.; Hatami, A. and Shoukri, M.R. (2011): Study on duration of maternal antibodies in calves against bovine herpesvirus type 1(BHV-1). Archives Of Razi. Institute, 66(1):25-28.

Gonzalez-garcia, M.A.; Arenas-Casas, A.; Carbonero-Martinez, A.; Borge-rodriguez, C.; Garcia-Bocanegra, I.; Maldonado, J.L.; Gomez-Pacheco, J.M.and Perea-Remujo, J.A. (2009): Seroprevalence and risk factors associate with bovine herpesvirus type1(BHV1)infection in non-vaccinated cattle herds in Andalusia (South of Spain). Spanish Journal Of Agricutural  Research, 7(3): 550-554.

Hashemi, T.; Rad, G.R.; Naseri, M. and Azizzadeh, M. (2009): Detection of antibody against infectious bovine rhinotrachitis glycoprotein gE in aborted cattle in Mashhad, Iran. Archives Of Razi Institute, 64(2): 91-95.

Johannes, A.K.; Malcolm, B.; Martin, B.; Pierre, K.; Myriam, P.; Gerard, J.W. and Jan, T.V.O. (2004): Evaluation of tests for antibodies against bovine herpesvirus 1 performed in national reference laboratories in Europe. Veterinary Microbiology, 102: 169-181.

Julien, T.; Veronique, K.; Benoit, M.; Francois, M.; Sacha, G.; Alain, V. and Etienne, T. (2006): Ruminant alphaherpesviruses related to bovine herpesvirus 1.Vet. Res., 37: 169-190.

Kamataj, G.; Rana, S.K. and Srinivasan, V.A. (2009): Serological response in cattle immunized with inactivated oil and algel adjuvant vaccines against infectious bovine rhinotrachitis. New Microbiologica, 32: 135-141.

Madic, J.; Magdalena, J.; Quak, J. and Oirschot, J.T. (1995): Isotype–specific antibody response to bovine herpesvirus 1 in sera and mucosal secretion of calves after experimental reinfections and after reactivation. Veterinary Immunology and Immunopathology, 47: 81-92.

Maria do Carmo, C.; Edviges Maristela, P.; Ricardo Spacagna, J.; Claudia Pestana, R.; Moacir Marchiori, F. and Helio Jose, M. (2011): Systemic and local antibodies induced by an experimental inactivated vaccine against bovine herpesvirus type 1. Ciencia Rural, 41(2): 307-313.

Mars, M.H.; Rijsewijk, F.A.M.; Maris, M.A.; Van-Orishot, J.T. and Hage, J.J. (2000): Presence of bovine herpesvirus 1 gB-serpostive but gE-seronegative Dutch cattle with no apparent virus exposure. veterinary Record, 147(12): 328-331.

Mylene, L.; Vincent, W.; Jacques, G.; Frederic, S.; Gilles, M.; Jean-Jacques, L. and Etienne, T. (2000): Effect of bovine herpesvirus type 1 infection in calves with maternal antibodies on immune response and virus latency. Journal of Clinical Microbiology, 38(5): 1885-1894.

Nardelli, S.; Farina, G.; Lucchini, R.; Valorz, C.; Moresco, A.; Dal Zotto, R. and Costanzi, C. (2008): Dynamic of  infection and immunity in a dairy cattle population undergoing an eradication programme for           infectious bovine rhinotrachitis (IBR). Preventive Veterinary Medicine, 85: 68-80.

Rai, A. (2005): Methods in veterinary virology, Indian Veterinary research Institute, India, PP:50-52.

Serpil, Y. (2005): Acomparative evaluation of bovine herpesvirus -1 infection by Enzyme Linked Immunosorbant assay and serum Neutralization test in KonyaProvince. Hayvancihk Arastrima Dergisi, 15: 5-8.

Tikko, S.K.; Campos, M. and Babiuk, L.A. (1995): Bovine herpes virus 1 (BHV1): Biology, Pathogenesis, and Control. Adv. Virus. Res., 45: 191-223.

Tolga, M.T.; Yakup, Y.; Nural, E. and Burak, A.G. (2006): The prevalence of bovine herpesvirus type 1(BHV-1) and bovine Leukemia virus (BLV) in selected dairy cattle herds in Aydin Province, Turkey. Turk Journal Veterinary Animal Science, 30: 353-357.

Winkler, M.T.; Doster, A. and Jones, C. (2000): Persistence and reactivation of bovine herpesvirus 1 in the tonsils of latency infected calves. Journal Of Virology, 74(11): 5337-5346.