植物におけるRNA-induced silencing complexの無細胞形成系の確立
p. 0857
詳細
p. 0857
RNA-induced silencing complex (RISC) はRNAサイレンシングによる遺伝子の転写後発現抑制やウイルスRNAの分解等において中心的な役割を果たすリボヌクレオタンパク質複合体である。RISCはコア因子としてARGONAUTEファミリーに属するタンパク質(AGO)と一本鎖の低分子量RNAを含むことが知られているが、これまで植物では無細胞RISC形成系が確立されておらず、その形成過程を生化学的に解析することができなかった。本研究で我々はタバコ脱液胞化プロトプラスト抽出液(BYL)を用いてAGO1と22ヌクレオチドの合成二本鎖siRNAからRISCを形成させる実験系を確立した。BYLにおけるRISC形成において、二本鎖siRNAはAGO1にATP、Mg2+、さらに分子シャペロンHSP90依存的に取り込まれ、続いて二本鎖siRNAのパッセンジャー鎖はAGO1のRNase活性依存的に取り除かれた。形成されたRISCはガイド鎖のsiRNAと相補的な配列を含む標的 RNAと結合しそれを切断した。
