胚胎实验室解读：获卵数对体外受精妊娠结局的影响

doi:10.12307/2023.285

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (24): 3871-3876.doi: 10.12307/2023.285

• 干细胞基础实验 basic experiments of stem cells • 上一篇下一篇

胚胎实验室解读：获卵数对体外受精妊娠结局的影响

高文怡1，张东2，李采霞1，杜娟1，张艳茹1，邓云1

1中国人民解放军联勤保障部队第904医院，江苏省无锡市 214000；2南京医科大学生殖医学国家重点实验室，江苏省南京市 211166

收稿日期:2022-04-06 接受日期:2022-05-24 出版日期:2023-08-28 发布日期:2023-01-19
通讯作者: 邓云，硕士，主任医师，中国人民解放军联勤保障部队第904医院，江苏省无锡市 214000
作者简介:高文怡，女，1995年生，江苏省无锡市人，汉族，2020年南京医科大学毕业，硕士，检验师，主要从事辅助生殖技术与胚胎发育研究。
基金资助:
国家重点研发计划项目(2018YFC1003402)，项目负责人：张东；国家自然科学基金资助项目(32070840)，项目负责人：张东

Interpretation of the embryo laboratory: number of oocytes retrieved affects the pregnancy outcomes of in vitro fertilization

Gao Wenyi1, Zhang Dong2, Li Caixia1, Du Juan1, Zhang Yanru1, Deng Yun1

1The 904 Hospital of the PLA Joint Logistics Support Force, Wuxi 214000, Jiangsu Province, China; 2State Key Laboratory of Reproductive Medicine, Nanjing Medical University, Nanjing 211166, Jiangsu Province, China

Received:2022-04-06 Accepted:2022-05-24 Online:2023-08-28 Published:2023-01-19
Contact: Deng Yun, Master, Chief physician, The 904 Hospital of the PLA Joint Logistics Support Force, Wuxi 214000, Jiangsu Province, China
About author:Gao Wenyi, Master, Laboratorian, The 904 Hospital of the PLA Joint Logistics Support Force, Wuxi 214000, Jiangsu Province, China
Supported by:
National Key Research & Development Plan Program, No. 2018YFC1003402 (to ZD); National Natural Science Foundation of China, No. 32070840 (to ZD)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

控制性促排卵提高获卵数的利弊：通过控制性促排卵以增加获卵数是增加胚胎形成可能性的有利手段，然而过度追求获卵数会因为卵巢过度刺激导致对卵母细胞质量、子宫内膜状态等多方面的不利影响。
体外受精结局：辅助生殖中体外受精治疗的最终目标是以最小的代价获得健康、足月的单胎婴儿，具体表现为胚胎受精结局与临床妊娠结局。

背景：控制性超促排卵逐渐成为增加获卵数的常规手段，但关于获卵数是否越多越好一直存在争议，理想的获卵数区间目前尚未有统一的结论。
目的：探讨获卵数对体外受精治疗周期中胚胎受精结局与临床妊娠结局的影响。
方法：将489例进行体外受精治疗(包含常规体外受精与卵胞质内单精子注射)的患者按照获卵数进行分组，分以下5组：1-4枚组、5-8枚组、9-12枚组、13-16枚组、≥17枚组。比较各组受精率、卵裂率、可移植胚胎率、优质胚胎率以及临床妊娠结局，分析获卵数对体外受精结局的影响。

结果与结论：获卵数与正常受精率、可移植胚胎率、优质胚胎率显著相关，过多或过少的获卵数均会导致正常受精率降低，异常受精率增加；可移植胚胎率与优质胚胎率下降；临床妊娠率、胚胎种植率与活产率下降。结果表明，过多或过少的获卵数会导致胚胎质量下降，影响体外受精临床结局，获卵数在5-16枚为宜，9-12枚为佳。临床医生在促排卵过程中，不能只以提高获卵数量为目标，应该追求足够多的高质量卵母细胞，为不同患者合理制定个性化促排方案。

https://orcid.org/0000-0002-7310-0825 (高文怡)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 获卵数, 受精率, 可移植胚胎率, 优质胚胎率, 临床妊娠率, 胚胎种植率, 活产率

Abstract: BACKGROUND: Controlled ovarian hyperstimulation has gradually become a routine method to increase the number of oocytes retrieved, but there has been controversy over whether the more oocytes retrieved the better. There is still no unified conclusion about the ideal range of egg retrieval number.
OBJECTIVE: To explore the effect of number of oocytes retrieved on embryo fertilization outcome and clinical pregnancy outcome in fertilization in vitro treatment cycle.
METHODS: 489 patients undergoing in vitro fertilization treatment (including conventional in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection) were divided into the following five groups according to the number of oocytes retrieved: 1-4 group, 5-8 group, 9-12 group, 13-16 group, and ≥17 group. The fertilization rate, cleavage rate, transferable embryo rate, high-quality embryo rate, and clinical pregnancy outcome were compared in each group, and the effect of the number of oocytes retrieved on the outcome of in vitro fertilization was analyzed.
RESULTS AND CONCLUSION: The number of oocytes retrieved was significantly correlated with the normal fertilization rate, transferable embryo rate, and high-quality embryo rate. Too many or too few retrieved oocytes could lead to a decrease in the normal fertilization rate and an increase in the abnormal fertilization rate, a decrease in the rates of transferable embryos and high-quality embryos, a decrease in the clinical pregnancy rates, embryo implantation rates, and live birth rates. In conclusion, too many or too few oocytes retrieved can lead to the decline of embryo quality and affect the clinical outcome of in vitro fertilization. The number between 5 and 16 oocytes may be appropriate, while the number between 9 and 12 oocytes may be optimal. During ovulation induction, clinicians should not only aim to increase the number of oocytes retrieved, but should pursue enough high-quality oocytes to reasonably formulate personalized ovulation induction programs for different patients.

Key words: number of oocytes retrieved, fertilization rate, transferable embryo rate, high-quality embryo rate, clinical pregnancy rate, embryo implantation rate, live birth rate

中图分类号:

高文怡, 张东, 李采霞, 杜娟, 张艳茹, 邓云. 胚胎实验室解读：获卵数对体外受精妊娠结局的影响[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(24): 3871-3876.

Gao Wenyi, Zhang Dong, Li Caixia, Du Juan, Zhang Yanru, Deng Yun. Interpretation of the embryo laboratory: number of oocytes retrieved affects the pregnancy outcomes of in vitro fertilization[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(24): 3871-3876.

图/表（结果） 12

2.1 各组基本情况比较 489例患者共获卵4 675枚，其中1-4 枚组89例患者，共获卵244枚；5-8 枚组147例患者，共获卵970枚；9-12枚组137例患者，共获卵1 414枚；13-16枚组66例患者，共获卵951枚；≥17枚组50例患者，共获卵1 096枚。获卵数的分布如图1所示，各周期获卵数量主要集中于6-11枚。获卵数1-7枚的周期数随获卵数增加逐渐增加，获卵数8-11枚的周期数处于平台状态，获卵数12枚以上的周期数随获卵数增加逐渐减少。

比较5组间患者女方年龄、不孕年限、女方体质量指数、基础卵泡刺激素、基础窦卵泡等指标，除了女方体质量指数各组间差异无显著性意义(P > 0.05)之外，其余参数各组间差异均有显著性意义(P < 0.05)。获卵数1-4枚组女方年龄最大、不孕年限最长、基础卵泡刺激素值最高、基础窦卵泡数最少。随着获卵数量增加，女方年龄逐渐变小，其中1-4枚组、5-8枚组显著高于其他3组(P < 0.05)；不孕年限逐渐缩
短，其中1-4枚组显著高于其他4组(P < 0.05)；基础卵泡刺激素值逐渐降低，其中1-4枚组、5-8枚组显著高于其他3组(P < 0.05)；基础窦卵泡数逐渐增加，各组间差异均有显著性意义(P < 0.05)，见表1。

2.2 获卵数影响受精
2.2.1 获卵数影响正常受精率 5组平均正常受精率为72.56%，各组正常受精率分别为70.90%，77.01%，77.44%，70.45%，64.51%，差异存在显著性意义(P < 0.01)。其中5-8枚组、9-12枚组正常受精率均显著高于其他3组(P < 0.05)，13-16枚组正常受精率显著高于≥17枚组(P < 0.05)，见表2与图2A。获卵数过多或过少的1-4 枚组、≥17枚组均出现正常受精率降低的情况。

2.2.2 获卵数影响异常受精率 5组平均异常受精率为3.87%，分别为5.32%，2.47%，3.39%，3.58%，5.66%，各组异常受精率存在显著性差异(P < 0.05)，其中5-8 枚组异常受精率显著低于1-4枚组、≥17枚组，且9-12枚组、13-16枚组异常受精率显著低于≥17枚组，见表3与图2B。获卵数过少或过多的1-4枚组、≥17枚组均有异常受精率增加的趋势。因此，为提高正常受精率，降低异常受精率，最佳获卵数以5-16枚为宜。

2.3 获卵数不影响卵裂 5组平均卵裂率为97.02%，分别为97.69%，96.65%，97.53%，97.46%，96.04%，各组间卵裂率无显著性差异(P=0.352)，获卵数不影响卵裂。其中获卵最多的≥17枚组卵裂率相较其他组有下降趋势，但未构成显著性差异，见表4与图2C。为保障稳定的卵裂率，获卵数不宜超过16枚。

2.4 获卵数影响胚胎质量
2.4.1 获卵数影响可移植胚胎率 5组平均可移植胚胎率为75.50%，分别为70.52%，77.91%，79.54%，75.37 %，68.03%，各组间可移植胚胎率有显著性差异(P < 0.01)，其中5-8 枚组可移植胚胎率显著高于1-4 枚组、≥17枚组；9-12枚组可移植胚胎率显著高于1-4枚组、13-16枚组、≥17枚组；13-16枚组可移植胚胎率显著高于≥17枚组，见表5与图2D。获卵数过少或过多的1-4枚组、≥17枚组均出现可移植胚胎率降低，为保障更佳的可移植胚胎率，获卵数以5-16枚为宜，9-12枚最佳。

2.4.2 获卵数影响优质胚胎率 5组平均优质胚胎率为54.01%，分别为45.67%，54.35%，58.54%，58.81%，44.13%，各组间优质胚胎率有显著性差异(P < 0.01)，其中5-8枚组、9-12枚组、13-16枚组优质胚胎率均显著高于1-4枚组、≥17枚组，见表6与图2E。获卵数过少或过多的1-4枚组、≥17枚组均可见优质胚胎率降低，为保障更佳的优质胚胎率，获卵数以5-16枚为宜。

2.5 获卵数影响体外受精结局
2.5.1 获卵数影响胚胎种植率 5组平均胚胎种植率为31.11%，分别为21.26%，30.36%，39.36%，34.78%，17.22%，各组间胚胎种植率有显著性差异(P < 0.001)，其中9-12枚组胚胎种植率均显著性高于1-4枚组、5-8枚组、≥17枚组；5-8枚组、13-16枚组胚胎种植率显著性高于1-4枚组、≥17枚组，见表7与图3A。获卵数过少或过多的1-4枚组、≥17枚组均出现胚胎种植率显著性降低。为获得更好的胚胎种植率，获卵数以5-16为宜，9-16枚最佳。

2.5.2 获卵数影响临床妊娠率 5组平均临床妊娠率为46.10%，分别为30.48%，43.21%，58.22%，51.64%，33.34%，各组间临床妊娠率差异有显著性意义(P < 0.001)，其中9-12枚组临床妊娠率显著高于1-4枚组、5-8枚组、≥17枚组；5-8枚组、13-16枚组临床妊娠率分别显著性高于1-4枚组、≥17枚组，见表8与图3B。获卵数过少或过多的1-4枚组、≥17枚组妊娠率显著性降低。因此，为获得更好的临床妊娠率，获卵数以5-16枚为宜，9-12枚最佳。

2.5.3 获卵数影响活产率 5组平均活产率为39.01%，分别为21.95%，34.17%，52.11%，45.90%，24.72%，各组间活产率有显著性差异(P < 0.001)，其中9-12枚组、13-16枚组活产率显著性高于1-4枚组、5-8枚组、≥17枚组；5-8枚组活产率显著性高于1-4枚组。获卵数过少或过多的1-4枚组、≥17枚组均可见活产率显著性降低，见表9与图3C。为获得更好的活产率，获卵数以5-16枚为宜，9-16枚为佳。

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引言

材料方法

1.1 设计对比观察试验，两组间计量资料比较采用t检验，多组间计量资料比较采用单因素方差分析，计数资料比较采用卡方检验。
1.2 时间及地点试验于2015年1月至2020年12月在中国人民解放军联勤保障部队第904医院生殖中心胚胎实验室完成。
1.3 对象选取2015-01-01/2020-12-30期间，在中国人民解放军联勤保障部队第904医院生殖中心进行体外受精(包含常规体外受精与卵胞浆内单精子注射)治疗的489例患者为研究对象。
纳入标准：①不孕原因为排卵障碍、输卵管性不孕、子宫内膜异位症、不明原因以及男方因素不孕；②促排卵方案采用标准长方案进行超促排卵；③患者年龄20-50岁，月经正常；④首次接受体外受精治疗的患者。
排除标准：①有卵巢手术史或肿瘤病史；②供卵患者；③取卵周期中没有取得卵子的患者；④多囊卵巢综合征患者；⑤卵子冷冻或卵子体外成熟的患者。
该研究的开展符合中国人民解放军联勤保障部队第904医院的相关伦理要求，且均经患者及其家属同意。
1.4 方法
1.4.1 体外受精治疗方法为规避试验误差，该研究中所有周期均采用标准长方案进行超排卵，经B超监测，最大卵泡直径≥18 mm，且同时3个卵泡直径≥16 mm时，当天晚上注射人绒毛膜促性腺激素，36 h后超声引导下穿刺取卵。丈夫于取卵日采用手淫法取精，通过密度梯度离心法优化精液。取得的卵细胞体外培养三四个小时后，采用3037法进行短时受精或采用卵胞浆内单精子注射法受精[6]。加精后16-18 h，观察受精情况，43-45 h观察卵裂情况，67-69 h观察胚胎形态并评级。采用Gardner方法评估胚胎质量[7]，Ⅰ级、Ⅱ级胚胎为优质胚胎，Ⅰ-Ⅲ级胚胎则为可移植胚胎，其余质量太差，为不可用胚胎[6]。部分胚胎进行囊胚培养，通过体外培养进一步筛选出其中发育潜能更佳者[8]。囊胚质量根据滋养外胚层细胞数量以及内细胞团数量与紧密度评分[9]，AA、AB、BA、BB均为优质囊胚，优质囊胚与BC、CB级囊胚为可移植囊胚。
根据胚胎评级决定移植与冷冻策略，参考女方患者内膜情况，选择1枚或2枚胚胎进行移植。移植后14 d左右抽血检测人绒毛膜促性腺激素，移植后4-6周超声检查，判断是否临床妊娠。
1.4.2 分组方法与观察指标按获卵数量多少，将489例患者分为5组：1-4 枚组、5-8 枚组、9-12枚组、13-16枚组、≥17枚组，比较各组间胚胎受精结局指标与临床妊娠指标。胚胎受精结局指标包括正常受精率、异常受精率、卵裂率、可移植胚胎率、优质胚胎率；临床妊娠指标包括临床妊娠率、着床率、活产率。指标计算方式符合胚胎实验室关键指标质控专家共识[6]。
1.5 统计学分析采用SPSS 24.0软件进行统计分析，计量资料均以x±s的形式表示，两组间计量资料比较采用t检验，多组间计量资料间比较采用单因素方差分析，计数资料以率的形式表示，率的比较采用χ2检验。P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过中国人民解放军联勤保障部队第904医院生物统计学专家审核。

讨论

在不具备新鲜胚胎移植的条件下，将全部可用胚胎冷冻保存，以备将来冻融胚胎移植是大部分中心的共识[10-11]。随着控制性超促排卵与全胚冷冻策略的应用愈发广泛，临床医生对体外受精治疗周期中患者获卵数的期待也愈发提高[12]。迄今为止，关于获卵数量与妊娠结局之间关系的研究未曾间断，KOK等[13]则认为获卵数增加虽然导致部分卵母细胞未成熟，但妊娠结局并不受此影响。然而，其他学者则持相反观点，认为过多或过少的获卵会反向影响妊娠结局，几项研究为获得最佳妊娠结局推荐了最佳获卵数或获卵区间[5，14-18]。
JI等[14]认为最佳获卵区间为6-15枚。CHEN等 [15]则提出，多囊卵巢综合征患者的获卵数超过10枚时，没能获得更好的临床结局。VAN DER GAAST等[16]则认为最佳获卵数量为13枚，获卵小于或超过13枚时，临床妊娠率均有所下降。MAGNUSSON等[17]认为，对于所有年龄段患者而言，获卵18枚可以获得最佳的累积活产率。SUNKARA等[5]认为最佳获卵区间为15-20枚。LAW等[18]则认为，最佳获卵数与年龄相关，对18-35岁女性而言，理想的获卵数约为25枚，对36-44岁女性而言，理想的获卵数为30枚以上，而对45岁以上女性而言，获卵数9枚较为合适。这些研究中样本量、患者年龄、研究方法都不尽相同，因此结论存在较大的差异。但这些结果让研究者相信获卵数与妊娠结局的相关性是可能成立的。
该研究不仅仅从临床结局考量，也从胚胎实验室角度出发，探究获卵数与胚胎结局之间的相关性，并找到获卵数量的最佳区间。选取2015年1月至2020年12月在中国人民解放军联勤保障部队第904医院生殖中心行体外受精治疗的患者489例为研究对象，将其按照获卵数量多少分为5组：1-4枚组、5-9枚组、10-12枚组、13-16枚组、17枚以上组，从而比较这5组间受精情况、卵裂情况、胚胎质量与体外受精结局，结果显示，获卵数影响受精，过多或过少的获卵数均会导致正常受精率降低，异常受精率最佳；获卵数对卵裂的影响无统计学意义；获卵数影响胚胎质量，过多或过少的获卵数均会导致可移植胚胎率与优质胚胎率下降；获卵数影响体外受精结局，过多或过少的获卵数均会导致临床妊娠率、着床率与活产率下降。结合以上各项结果，作者认为最佳获卵数以5-16枚为宜，10-12枚为佳。
作者试分析获卵数过多或过少造成不良妊娠结局的原因。首先，过多的获卵数往往伴随过度的卵巢刺激，越来越多的研究表明控制性超促排卵会造成卵母细胞的异常减数分裂与错乱的表观修饰，还与颗粒细胞的凋亡相关[19-21]。卵母细胞的减数分裂异常与表观修饰错乱会导致胚胎发育潜能低下与非整倍体的发生。MCCULLOH等[22]研究表明，卵巢过度刺激会增加胚胎非整倍体的发生：BAART等[23]运用荧光原位杂交技术证明卵巢刺激与胚胎嵌合体的增加相关。更早之前MILLIKEN等[24]就已经在小鼠模型上证明了卵巢激素可使中心体循环失调，导致染色体非整倍性和不稳定性增加。由此，作者推断过多的获卵数导致不良妊娠结局的原因，可能在于卵巢过度刺激，卵子质量下降导致形成胚胎非整倍体与嵌合体胚胎的可能性增加，胚胎染色体异常，具体表现为胚胎发育潜能低下以及形态学异常，进而不可用胚胎相对增加，优质胚胎相对减少。其次，获卵数过少则直接导致可用于体外受精的配子减少，若遇到卵母细胞不成熟无法进行受精，则可供选择的胚胎少之甚少，导致不良临床结局甚至周期取消率增加。另外，该研究表明，获卵数量过少伴随着女方年龄的相对较大与不孕年限的相对较长，作者无法完全排除年龄对患者胚胎体外受精结局与临床妊娠结局的影响。但已有多项研究可以对该研究进行补充，其结果表明获卵数过少对不良妊娠结局的影响与年龄无关。SALDEEN等[25]认为相同年龄段的女性患者中，获卵数过少会导致周期取消率增加以及不理想的妊娠结局。路红琴等[26]研究表明获卵数≤5枚的患者中，不同年龄段患者新鲜胚胎移植活产率与累计活产率均不同程度地下降。VERBERG等[27]认为获卵数过少会导致体外受精治疗周期成功率降低。FIGUEIRA等[28]则认为，35岁以下的年轻患者获卵数过少也会影响临床妊娠结局。该研究按照获卵数量分组，分组间基线分布不均，其中获卵17枚以上的周期数量较少(n=51)，但无法改变，现实情况就是17枚以上的高获卵数是相对较少的。该研究采用回顾性分析，尽管已经对样本进行筛选，但仍无法避免回顾性分析的固有偏倚。同时，年龄对体外受精结局的影响无法完全规避，作者在相关文献中找到了补充说明的证据。尽管存在上述不足，但该研究从实验室角度出发，探究获卵数量的最佳范围，对临床医生与患者在获卵数量与卵巢刺激之间平衡与取舍时提供必要的参考。作者不建议只将获卵数量作为唯一目标，尤其获卵高于17枚时，各项数据均未得到想象中的优化。作者建议临床医生将获得更多高质量的卵母细胞作为工作目标，保障卵巢处于更接近正常生理水平的状态，减少对其刺激，从而获得足够数量的高质量卵子。获卵数以5-16枚为宜，10-12枚为佳，不仅能有效减少并发症的发生，改善子宫内膜容受性，还能提高卵子质量，获得更理想的体外受精结局。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

胚胎实验室解读：获卵数对体外受精妊娠结局的影响

Interpretation of the embryo laboratory: number of oocytes retrieved affects the pregnancy outcomes of in vitro fertilization

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