【緒言】これまで我々は、脂肪由来間葉系幹細胞(ADSC)と肝細胞の二層化シートを作製し、肝細胞単独シートと比較して、細胞活性の高い肝細胞が維持されることを報告した。また、二層化シートは、細胞シートの強度が改善し移植手技の難易度が大幅に改善した。しかし、細胞シートの強度に関する十分な評価が得られていなかった。本研究では、肝細胞とADSCの二層化シートの細胞間接着に着目し、細胞接着分子の免疫染色と電子顕微鏡によるtight junctionの観察を行った。【方法】マウスの皮下脂肪より分離したADSCを温度応答性培養皿で培養し、同系マウスより分離した肝細胞を播種し、二層化シートを作製した。作製した細胞シートを、それぞれfibronectin、E-cadherinの免疫染色にて細胞接着の状態を確認した。また電子顕微鏡を用いて、細胞間のtight junctionを観察した。【結果】細胞シートを浮遊させると、二層化シートは、シート構造を保ったまま浮遊したが、肝細胞単独シートは崩れ易く、シート構造を保つことが困難であった。fibronectin、E-cadherinの免疫染色では、二層化シートの方が細胞間において、より高発現を示した。電子顕微鏡では、二層化シートの方がより太く長いtight junctionが確認できた。このtight junctionの差が、fibronectin、E-cadherinの免疫染色における染色強度の差と考えられた。【結論】肝細胞単独シートと比較して、肝細胞とADSCによる二層化シートは、より強い細胞間接着を認めた。ADSCの付加により、細胞間接着がより強固になり、細胞シートの強度が増したと考えられた。
