O Aspergillus fumigatus é um fungo encontrado em todas as regiões no mundo. Nos últimos anos, o A. fumigatus deixou de ser apenas um fungo saprofítico de menor importância, para se tornar um dos principais agentes patogênicos oportunistas em pacientes imunossuprimidos. A atividade mitocondrial está diretamente relacionada com o processo de germinação dos conídios deste fungo. As mitocôndrias apresentam duas membranas: a membrana mitocondrial externa e a interna. A maioria das proteínas mitocondriais são codificadas pelo DNA nuclear, sendo endereçadas para as mitocôndrias após a sua síntese no citosol. Os complexos mitocondriais TOM (translocases de membrana mitocondrial externa) e TIM (translocases de membrana mitocondrial interna) são responsáveis por reconhecer e endereçar estas proteínas para os diferentes compartimentos mitocondriais. Um dos componentes do complexo TOM é a subunidade Tom20, cuja função ainda não foi descrita em A. fumigatus. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a função do gene tom20 de A. fumigatus através da expressão heteróloga deste em Saccharomyces cerevisiae tom20+/-. Para isso, o gene Aftom20 foi clonado em vetor pYES2/CT pela técnica CPEC. Posteriormente, a levedura S. cerevisiae tom20+/- foi transformada com a construção pYES2/Aftom20. A seguir, foi realizada a indução da expressão do gene Aftom20 nesta levedura, sendo tal expressão confirmada por PCR quantitativo em tempo real. A presença da proteína recombinante nas mitocôndrias da levedura transformada com a construção pYES2/Aftom20 foi confirmada por Western Blotting. A sequência deduzida de aminoácidos desta proteína foi analisada apresentando 211 aminoácidos. Ao comparar a taxa de crescimento da levedura que expressava a proteína recombinante, com a daquela que não a expressava, foi constatado que não há diferença entre os crescimentos destas leveduras em meio fermentável. A medida do potencial de membrana mitocondrial de esferoplastos recombinantes de S. cerevisiae tom20+/-, evidenciou que nestes, o NADH induziu a formação de um potencial de membrana mitocondrial maior do que nos esferoplastos que não expressavam a proteína recombinante. Além disso, estes últimos não foram capazes de realizar a fosforilação de ADP. Assim, estes resultados sugerem que a proteína recombinante Tom20 de A. fumigatus possui função importante para a atividade mitocondrial, por realizar o reconhecimento de proteínas que compõem a cadeia transportadora de elétrons e a ATP-sintase, possibilitando seu transporte para as mitocôndrias.

Aspergillus fumigatus is a fungus found in all regions of the world. In recent years, Aspergillus fumigatus is no longer just a low importance saprophytic fungus, but has become one of the main opportunistic pathogens in immunocompromised patients. The mitochondrial activity is directly related to with the conidial germination processes of this fungus. Mitochondria have two membranes: the outer and inner mitochondrial membrane. Most mitochondrial proteins are encoded by nuclear DNA, which are addressed to mitochondria after their synthesis in cytosol. The mitochondrial complexes TOM (translocase of the outer mitochondrial membrane) and TIM (translocase of the inner mitochondrial membrane) are responsible for recognize and address these proteins to the different mitochondrial compartments. One of TOM complex components is Tom20 subunit, but its function has not yet been described in A. fumigatus. Thus, the objective of this work was to study the function of A. fumigatus tom20 gene through its heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae tom20+/-. In this sense, the Aftom20 gene was cloned into pYES2/CT vector by CPEC technique. Subsequently, the S. cerevisiae tom20+/- yeast was transformed with pYES2/Aftom20 construction. Then, the expression of Aftom20 gene was induced in this yeast, and this expression was confirmed by quantitative real-time PCR. The presence of recombinant protein in the transformed yeast mitochondria with pYES2/Aftom20 construction was confirmed by Western Blotting. The deduced amino acid sequence of this protein was analyzed, and it has 211 amino acids. The comparison between the growth rate of the yeast that expressed the recombinant protein with the growth rate of the yeast that did not express it, showed that there is no difference between the growth of these yeasts in fermentable medium. The measuring the mitochondrial membrane potential of S. cerevisiae tom20+/- recombinant spheroplasts, evidenced that NADH induced the formation of a higher mitochondrial membrane potential in these spheroplasts than in those that did not express the recombinant protein. Furthermore, this last one was not able to carry out ADP phosphorylation. Therefore, these results suggest that the recombinant Tom20 protein from A. fumigatus has an important role in mitochondrial activity, performing the recognition of electron carrier chain proteins and the ATP-synthase, enabling their transport to the mitochondria.