Antiserum to mouse pluripotent hemopoietic stem cells (CFU-S): Evidence for a role of complement in the inactivation of CFU-S in diffusion chambers

Zusammenfassung

Antimäusehirnserum vom Kaninchen (RAMBS) zeigt Aktivität gegen pluripotente hämopoetische Stammzellen der Maus (CFU-S). Zur Abklärung des Mechanismus der Inaktivierung der CFU-S durch RAMBS wurden Knochenmarkzellen der Maus 1) mit RAMBS + Komplement (C), 2) mit RAMBS allein inkubiert. Die Beeinflussung des Wachstums der CFU-S wurde in Diffusionskammern 4 Tage nach Implantation in Mäuse untersucht. Durch Vorinkubation mit RAMBS + C wurden die CFU-S auf 20 %, durch Vorinkubation und mit RAMBS allein auf etwa 70% gegenüber unbehandelten Kontrollkammern gesenkt. Die Unterschiede im Zellwachstum deuten daraufhin, daß die Zugabe von Komplement den Hemmeffekt des Antiserums auf das CFU-S-Wachstums in Diffusionskammern verstärkt. Allerdings läßt sich dieser Hemmeffekt nicht nachweisen, wenn das CFU-S-Wachstum sofort nach der Inkubation mit RAMBS alleine oder mit RAMBS + C anhand der Milz-Koloniebildung letal bestrahlter Mäuse getestet wird. Es wird diskutiert, daß der C-bedingte Hemmeffekt durch Granulozyten und/oder Makrophagen bewirkt wird, die in den Diffusionskammern die mit IgG und C3 opsonisierten CFU-S vermehrten phagozytieren vermögen. Diese Befunde könnten für andere Systeme Bedeutung erlangen, zum Beispiel für Langzeit-in-vitro-Kulturen.

Summary

Anti-mouse brain serum raised in rabbits (RAMBS) is known to contain activity against mouse pluripotent hemopoietic stem cells (CFU-S). To further elucidate the nature of the inactivation of CFU-S by RAMBS we treated mouse bone marrow cells with RAMBS alone, or with RAMBS plus complement (C), and observed the effects on the growth of CFU-S in diffusion chambers four days after implantation into the peritoneal cavities of mice. The chambers seeded with marrow cells that were treated with RAMBS + C contained less than 20 % of the number of CFU-S contained in their control chambers; but the chambers seeded with marrow cells that were treated with RAMBS alone contained about 70% as many CFU-S as did their control chambers. This difference in cell growth strongly suggests that the addition of C to RAMBS potentiates the antiserum's suppressive effect on CFU-S growth in diffusion chambers, even though cells incubated with RAMBS alone demonstrate the same amount of CFU-S inactivation as that demonstrated by cells incubated with RAMBS + C when assayed immediately after incubation by the capacity to form surface spleen nodules in lethally irradiated mice. It is postulated that the C-mediated effect may be effected by granulocytes and/or macrophages in the diffusion chambers which are capable of phagocytosing IgG and C3-opsonized CFU-S. These findings might be extended to other systems, such as the long-term in vitro culture.