Периэндотелиально расположенные мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК) рассматриваются как одно из наиболее вероятных депо, из которого МСК могут быть мобилизованы в случае повреждения тканей. В настоящей работе проанализировано, как нарушение прямой межклеточной коммуникации при ингибировании гомотипических щелевых контактов (ЩК) может влиять на свойства МСК, востребованные в процессах заживления и восстановления тканей: состояние внутриклеточных компартментов, паракринную, в частности ангиогенную активность, способность к миграции и фагоцитозу. В культивируемых митотически неактивных МСК коммуникацию через ЩК подавляли с помощью специфического ингибитора карбеноксолона. С помощью проточной цитофлуориметрии в МСК с заблокированными ЩК было показано двукратное увеличение массы митохондрий (зонд MitoTracker Green). Трансмембранный потенциал митохондрий (зонд JC-1) и уровень активных форм кислорода (измеренный с помощью зонда CM-H2DCFDA), а также активность лизосомального компартмента (зонд Ly-soTracker Green) при этом не изменялись...

Периэндотелиально расположенные мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК) рассматриваются как одно из наиболее вероятных депо, из которого МСК могут быть мобилизованы в случае повреждения тканей. В настоящей работе проанализировано, как нарушение прямой межклеточной коммуникации при ингибировании гомотипических щелевых контактов (ЩК) может влиять на свойства МСК, востребованные в процессах заживления и восстановления тканей: состояние внутриклеточных компартментов, паракринную, в частности ангиогенную активность, способность к миграции и фагоцитозу. В культивируемых митотически неактивных МСК коммуникацию через ЩК подавляли с помощью специфического ингибитора карбеноксолона. С помощью проточной цитофлуориметрии в МСК с заблокированными ЩК было показано двукратное увеличение массы митохондрий (зонд MitoTracker Green). Трансмембранный потенциал митохондрий (зонд JC-1) и уровень активных форм кислорода (измеренный с помощью зонда CM-H2DCFDA), а также активность лизосомального компартмента (зонд Ly-soTracker Green) при этом не изменялись. МСК с заблокированными ЩК менее активно мигрировали в модели раны. Способность к фагоцитозу частиц латекса была снижена. В кондиционированной среде (КС) от МСК с заблокированными ЩК по данным мультиплексного анализа уровень плейотропных цитокинов IL-6, IL-8, MCP-3 был значимо ниже. Эта КС не стимулировала ненаправленную миграцию эндотелиальных клеток и рост основных сосудов в хориоаллантоисной оболочке эмбриона перепела. Сделано предположение, что снижение эффективности прямой межклеточной коммуникации МСК−МСК in vivo может негативно отразиться как на функционировании стромальных предшественников в местах их расположения, так и на возможности их мобилизации из тканевых депо.

Perivascular multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) are considered as most likely putative depot for MSCs’ mobilization in case of tissue damage. Here, we analyzed the involvement of direct homotypic gap junctional intercellular communication (GJIC) in realization of MSC functions requested in tissue healing and repair: the state of intracellular compartments, paracrine, in particular angiogenic activity, the migration and phagocytosis. GJIC in growth arrested MSCs was suppressed with specific inhibitor, carbenoxolone. Using flow cytometry, a two-fold increase in mitochondrial mass (MitoTracker Green) was shown in MSCs with blocked GJ. The transmembrane mitochondrial potential (JC-1) and the ROS levels (CM-H2DCFDA probe), as well as the activity of the lysosomes (LysoTracker Green) did not change. MSCs with blocked GJs migrated less actively in the “scratch wounding” model. The phagocytosis of latex beads was reduced. According to multiplex immunofluorescence assay, the levels of pleiotropic cytokines IL-6, IL-8, and MCP-3 were significantly lower in the conditioned medium from MSCs with blocked GJs...

Perivascular multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) are considered as most likely putative depot for MSCs’ mobilization in case of tissue damage. Here, we analyzed the involvement of direct homotypic gap junctional intercellular communication (GJIC) in realization of MSC functions requested in tissue healing and repair: the state of intracellular compartments, paracrine, in particular angiogenic activity, the migration and phagocytosis. GJIC in growth arrested MSCs was suppressed with specific inhibitor, carbenoxolone. Using flow cytometry, a two-fold increase in mitochondrial mass (MitoTracker Green) was shown in MSCs with blocked GJ. The transmembrane mitochondrial potential (JC-1) and the ROS levels (CM-H2DCFDA probe), as well as the activity of the lysosomes (LysoTracker Green) did not change. MSCs with blocked GJs migrated less actively in the “scratch wounding” model. The phagocytosis of latex beads was reduced. According to multiplex immunofluorescence assay, the levels of pleiotropic cytokines IL-6, IL-8, and MCP-3 were significantly lower in the conditioned medium from MSCs with blocked GJs. This medium did not stimulate the non-targeted migration of endothelial cells and the growth of the tubule complexes in the chorioallantoic membrane of the quail embryo. It is supposed, that a decrease in the efficacy of direct MSC-MSC intercellular communication in vivo may negatively affect stromal cells’ functions on site as well as their mobilization from tissue depots.