Resumo

ESTUDO DO POTENCIAL DE MEMBRANA MITOCONDRIAL EM RATOS CIRRÓTICOS HEPATECTOMIZADOS APÓS APLICAÇÃO DE LASER¹ 1 Departamento de Cirurgia e Anatomia, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; Grupo de Óptica, Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo. 2 Pós-graduanda do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 3 Professora Doutora do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 4 Professor Titular do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 5 Professor Titular do Departamento de Física do Instituto de Física de São Carlos,USP. 6 Professor Associado do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP.

STUDY OF MITOCHONDRIAL MEMBRANE POTENTIAL IN CIRRHOTIC AND HEPATECTOMIZED RATS AFTER LASER IRRADIATION

Araujo Lima A. A. L. de² 1 Departamento de Cirurgia e Anatomia, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; Grupo de Óptica, Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo. 2 Pós-graduanda do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 3 Professora Doutora do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 4 Professor Titular do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 5 Professor Titular do Departamento de Física do Instituto de Física de São Carlos,USP. 6 Professor Associado do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. ;Ramalho L. N. Z.³ 1 Departamento de Cirurgia e Anatomia, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; Grupo de Óptica, Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo. 2 Pós-graduanda do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 3 Professora Doutora do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 4 Professor Titular do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 5 Professor Titular do Departamento de Física do Instituto de Física de São Carlos,USP. 6 Professor Associado do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. ;

Zucoloto S.⁴ 1 Departamento de Cirurgia e Anatomia, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; Grupo de Óptica, Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo. 2 Pós-graduanda do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 3 Professora Doutora do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 4 Professor Titular do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 5 Professor Titular do Departamento de Física do Instituto de Física de São Carlos,USP. 6 Professor Associado do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. ;Bagnato V. S.⁵ 1 Departamento de Cirurgia e Anatomia, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; Grupo de Óptica, Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo. 2 Pós-graduanda do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 3 Professora Doutora do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 4 Professor Titular do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 5 Professor Titular do Departamento de Física do Instituto de Física de São Carlos,USP. 6 Professor Associado do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. ;Silva Júnior O. de C.⁶ 1 Departamento de Cirurgia e Anatomia, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; Grupo de Óptica, Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo. 2 Pós-graduanda do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 3 Professora Doutora do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 4 Professor Titular do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. 5 Professor Titular do Departamento de Física do Instituto de Física de São Carlos,USP. 6 Professor Associado do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP.

Resumo: Através da determinação do potencial de membrana mitocondrial, o presente estudo relata os efeitos da irradiação laser sobre o estado energético do fígado cirrótico de ratos hepatectomizados. A cirrose hepática foi induzida por ligadura do ducto biliar comum. Os resultados revelaram melhora do status energético do fígado após irradiação.

Descritores: cirrose hepática, hepatectomia, laser, potencial de membrana mitocondrial.

Key Words: hepatic cirrhosis, hepatectomy, laser, mitochondrial membrane potential.

Introdução: A cirrose hepática é definida histologicamente pela existência de nódulos de regeneração circundados por tecido fibroso distorcendo completamente a arquitetura parenquimatosa. Constitui o estádio final, irreversível e comum de elevado número de hepatopatias crônicas de várias etiologias. A ressecção sobre fígados cirróticos ainda é bastante temida apesar dos avanços técnicos, pois ao contrário de fígados normais, na cirrose hepática há diminuição da capacidade de regeneração hepática e do grau de reserva funcional o que conduz a uma limitação cirúrgica pois obriga a uma redução na amplitude das ressecção⁶. Foi demonstrado que a irradiação laser em fígados normais de ratos hepatectomizados elevou a taxa mitótica deste órgão.^1,2 Este processo não foi elucidado em animais cirróticos. O laser é um sistema que amplifica a intensidade de luz, produzindo um feixe forte altamente direcionado com comprimento de onda específico⁷. O interesse neste tema reside na possibilidade de aplicação clínica complementar do laser para acelerar a regeneração do fígado cirrótico na vigência de ressecções sobre o órgão, tendo por finalidade maior o retorno funcional, sobretudo, e estrutural o mais precocemente possível. O objetivo deste estudo consiste na avaliação da capacidade energética do fígado cirrótico após hepatectomia parcial através da determinação do potencial de membrana mitocondrial (PM).

Métodos: Ratos Wistar machos (peso 200-250g) foram submetidos à ligadura do ducto biliar por 4 semanas para obtenção de cirrose biliar secundária. Usou-se a técnica do enovelamento do ducto biliar comum³: exposição do ducto biliar seguida de ligadura a 3 mm acima da junção biliopancreática com 5 nós de fio prolene 5.0 (Ethicon, YNC) e com o mesmo fio enovelando-se o ducto biliar comum em direção ascendente até 5mm da bifurcação, finalizada por uma ligadura adicional com 5 nós. Com esta técnica de enovelamento do ducto biliar foram obtidas alterações morfo-funcionais e bioquímicas compatíveis com obstrução biliar crônica e lesão hepática avançada. No pós-operatório os animais receberam vitamina K 15U, via subcutânea, a cada 3 dias. Estudaram-se cinco grupos CN; CC; CL; CH; CHL; respectivamente: controle normal; controle cirrótico; cirrótico irradiado; cirrótico hepatectomizado; cirrótico hepatectomizado e irradiado. Após 4 semanas da obstrução, seguiu-se a segunda fase do experimento. Nos grupos CH e CHL realizou-se hepatectomia a 30%, com excisão do lobo lateral esquerdo do fígado. Nos grupos CL e CHL procedeu-se a irradiação hepática. Usou-se laser vermelho, 630nm, 50mW/cm² por 5 minutos. Sacrifício e coleta de material se deu após 24h. O potencial de membrana (PM) foi determinado espectrofluoroscopicamente⁴ usando-se safranina O como indicador em fluorímetro SLM Aminco DW2000, comprimentos de onda de 495 nm para excitação e 586 nm para emissão.

Resultado: Em relação ao grupo CN houve diminuição do PM em todos os grupos cirróticos exceto no CHL (valores medianos CN, CC, CL, CH, CHL são respectivamente 147; 143; 144; 144; 149). Entre os cirróticos, o grupo CHL apresentou aumento do PM quando comparado aos demais (p<0,05). Outra diferença se deu entre CC e CL, com aumento do PM no ultimo (Tabela).

Discussão: A integridade do potencial da membrana mitocondrial corresponde diretamente a produção de energia. A transferêcia de elétrons ao longo da cadeia transportadora é acompanhada pela extrusão de prótons transmembrana mitocondrial e a energia inerente nesta diferença de concentração de prótons, a força próton-motora, representa uma conservação de parte da energia da oxidação, subseqüentemente usada na formação de ATP. Foi postulado⁵ que a absorção de luz pela cadeia transportadora de elétrons causaria aumento da força próton-motora, aumentando o potencial de membrana mitocondrial, conseqüentemente o pool de ATP. Neste trabalho, confirmou-se o aumento do potencial de membrana no grupo hepatectomizado e irradiado (CHL) em relação aos demais.

Conclusão: Neste trabalho aumento do PM no grupo CHL em relação aos demais revela uma melhora bioquímica da ação do laser sobre a cirrose o que poderá significar futuramente a possibidade de ampliação das ressecções sobre fígados cirróticos.

Datas de Publicação