MicroRNA-1调控人结肠癌细胞周期及其机制的研究

摘要 : 该研究通过阳离子脂质体介导的方法将microRNA-1(miR-1)转染入人结肠癌细胞HT-29和HCT 116, 使其过表达。应用MTS法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后细胞增殖及细胞周期的变化情况, 结果发现, miR-1能使HT-29和HCT 116细胞周期滞留在G1期, 显著抑制细胞的增殖; 通过靶基因预测及荧光素酶分析法预测并确定CCND1(cyclin D1)和CDK6(cyclin dependentkinases 6)是miR-1作用的靶基因。采用Western blot法检测细胞内相关蛋白质表达水平, 结果发现, miR-1能下调HT-29和HCT 116中细胞周期相关蛋白CDK2、CDK4、p-Rb(retinoblastoma gene)、E2F1(E2F transcription factor 1)、p-Cdc2(cell division cycle 2)等蛋白质水平。通过人结肠癌裸鼠动物模型检测miR-1对结肠癌细胞体内成瘤能力的改变情况, 研究发现, miR-1能在体显著抑制人结肠癌细胞增殖能力。该研究表明, miR-1通过下调靶基因cyclin D1、CDK6的表达, 并影响细胞周期相关蛋白CDK2、CDK4的水平, 下调了决定细胞周期进程的关键蛋白Rb及Cdc2的磷酸化水平, 同时也降低了E2F1蛋白质水平, 使细胞周期滞留在G1期, 从而抑制了细胞增殖。