Zusammenfassung
Es wurden Verfahren zur Trennung des freien und antikörpergebundenen Jod131-Insulins für die radioimmunologische Insulinbestimmung mit Agargelelektrophorese und Anionenaustauschern (Dowex 1 und Amberlite) beschrieben.
Verwendet wurde Jod131-Insulin vom Schwein, Rind und Menschen, das zum Teil nachGreenwood undHunter mit Chloramin T und NaJ131 selbst markiert wurde. Durch die Jod131-Markierung entstehen Verunreinigungen, die sich an α2-Globulin binden und durch einen besonderen Reinigungsprozeß mit Hilfe einer Sephadex-Säule abgetrennt werden müssen. Der Einfluß dieser Verunreinigungen sowohl auf das Meßergebnis als auch auf die Genauigkeit des radioimmunologischen Insulinbestimmungsverfahrens wird an typischen Beispielen demonstriert.
Mit gereinigtem Jod131-Insulin und der Verwendung von Anionenaustauschern ergibt sich eine hohe Genauigkeit mit einem Index von 0,039. Im Nüchternserum von 30 Stoffwechselgesunden wurde ein mittlerer immunologisch reagierender Insulingehalt von 22 ± 10 µE/ml gemessen. Nach einer oralen Glucosebelastung (100 g p. o.) fand sich bei 8 Stoffwechselgesunden nach 60 min ein maximaler Anstieg bis auf 128 µE/ml.
Summary
Various methods for separating the free and the antibodybound (J 131-)hormone in order to perform a sensitive and precise radio-immunochemical assay of serum insulin concentration have been investigated. Human, porcine and bovine insulin were studied. The insulin was labelled in part in the own laboratory by means of Chloramin-T and NaJ131 and in part commercially availableJ 131-insulin preparations were used. Considerable degradation of the insulin following the labelling procedure withJ 131 has been observed, leading to non-specific binding of the degradation products to α2-serum globulins, which interfered with the assay. The removal of those degradation products by Sephadex G 75 filtration has been shown in detail.
Separation of the free and the antibody-bound (J 131-)insulin has been achieved by means of agar electrophoresis and of anion-exchange resins (Dowex 1 and Amberlite CG-400 I). The latter technique yielded a sensitivity of 0.5–1µU insulin with a precision index ofλ 0.039. A mean fasting concentration of 22 ± 10µU Insulin per ml. has been determined in the serum of 30 normal subjects which in 8 cases rose to a maximum of 128µU insulin per ml. serum, 1 hour after 100 g glucose orally.
Literatur
Banerjee, R. N., andK. Gibson: Preparation and purification specific activity Insulin-131Jodine. J. Endocr.25, 145 (1962).
Ditschuneit, H., J. Chang-SuAhn, M. Pfeiffer u.E. F. Pfeiffer: Über die Bestimmung von Insulin im Blute am epididymalen Fettanhang der Ratte mit Hilfe markierter Glucose. Klin. Wschr.37, 1234 (1959).
Ditschuneit, H., J. D. Faulhaber u.E. F. Pfeiffer: Verbesserungen der Methode zur Bestimmung von Insulin im Blut mit Hilfe radioaktiver 1-C14-Glucose und dem epididymalen Rattengewebe. Atompraxis8, 172 (1962).
Greenwood, F. C., andW. M. Hunter: The preparation of131J-labelled Human growth hormone of high specific radioactivity. Biochem. J.89, 114 (1963).
Grodsky, G. M., andP. H. Forsham: An immunochemical assay of total extractable insulin in man. J. clin. Invest.39, 1070 (1960).
Groen, J., C. E. Kaminga, A. F. Willebrands, andJ. R. Blickman: Evidence for the presence of insulin in blood serum — A method for an approximate determination of the insulin content of blood. J. clin Invest.31, 97 (1952).
Hales, C. N., andP. J. Randle: Immunoassay of insulin with insulin-antibody precipitate, Biochem. J.88, 137 (1963).
Martin, D. F., A. E. Renold, andY. M. Dagenais: An assay for insulin like activity using rat adipose tissue. Lancet1958 I, 76.
Meade, R. C., andH. M. Klitgaard: A simplefied method for immuno-assay of human serum insulin. J. nucl. Med.3, 407 (1952).
Melani, F., H. Ditschuneit, H. H. Ditschuneit, A. Mucci u.E. F. Pfeiffer: Immunologische Bestimmung von Insulin im Blut mit Hilfe von Insulinantikörpern und Jod131-markiertem Insulin. 10. Symp. Dtsch. Ges. Endocrinol. Wien, März 1963, S. 252.
Melani, F., H. Ditschuneit, H. H. Ditschuneit, R. Petzoldt eE. F. Pfeiffer: Metodo immunologico per la determinazione dell'insulina nel siero per mezzo di insulina I 131 e di anticorpi anti-insulina. I. Symp. Internaz. sul Diabete. Modena, Settembre 1965 (im Druck).
Melani, F., H. Ditschuneit, H. H. Ditschuneit, R. Petzoldt u.E. F. Pfeiffer: Vergleichende Seruminsulinbestimmungen mittels einer biologischen und einer immunologischen in vitro Methode. Symp. über Diabetes Karlsburg, Greifswald, Oktober 1963 (im Druck).
Morgan, C. R., andA. Lazarow: Immunoassay of insulin two antibody system; plasma levels of normal, subi dabetic and diabetic rats. Diabetes12, 115 (1963).
Scheidegger, J. J.: Une micro-méthode de l'immunoélectrophorèse. Int. Arch. Allergy7, 103–110 (1955).
Vallance-Owen, J., andB. Hurlock: Estimation of plasma-insulin by the rat diaphragm method. Lancet1954 I, 68.
Yalow, R. S., andS. A. Berson: Assay of plasma insulin in human subjects by immunological methods. Nature (Lond.)21, 1648 (1959).
Yalow, R. S., andS. A. Berson: Immuno-assay of endogenous plasma insulin in man. J. clin. Invest.39, 1157 (1960).
Yalow, R. S., andS. A. Berson: Immunoassay of protein hormones. In: The Hormones. New York and London: Academic Press 1964.
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Stipendiat der Alexander von Humboldt-Stiftung 1964/65.
Mit Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft, Bad Godesberg.
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Melani, F., Ditschuneit, H., Bartelt, K.M. et al. Über die radioimmunologische Bestimmung von Insulin im Blut. Klin Wochenschr 43, 1000–1007 (1965). https://doi.org/10.1007/BF01747863
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DOI: https://doi.org/10.1007/BF01747863