Dichtegradienten-Zentrifugation menschlicher Blutplättchen. Enzymmuster und osmotische Resistenz einzelner Fraktionen

Zusammenfassung

Es wird eine Methode zur Fraktionierung menschlicher Blutplättchen durch Zentrifugation auf einem mit Ficoll erstellten diskontinuierlichen Dichtegradienten beschrieben. Bei den gewählten Versuchsbedingungen verteilen sich normale Plättchen nahezu gleichmäßig auf die vier isolierten Fraktionen. In der Gesamtpopulation, die als Ausgangsmaterial für die Fraktionierung diente, sowie in den Einzelfraktionen wurden das Extraktprotein und die Aktivitäten folgender Enzyme bestimmt: Lactatdehydrogenase (LDH), Malatdehydrogenase (MDH), Glucose-6-Phosphatdehydrogenase (G-6-PDH), Aspartataminotransferase (GOT), Pyruvatkinase (PK) und Glucosephosphat-Isomerase (PGI). Sämtliche Enzymaktivitäten sind in den Einzelfraktionen höher als in der Gesamtpopulation. Innerhalb der Fraktionen nahmen die Aktivitäten der LDH, G-6-PDH, PK und PGI von der spezifisch schwersten Fraktion zu der leichtesten hin um 27 bis 48% ab. Da die Alterung von Plättchen in vitro mit einer Verschiebung des Verteilungsmusters in Richtung auf die spezifisch leichten Fraktionen verbunden ist, wird die Abnahme der Enzymaktivitäten auf die physiologische Alterung der Plättchen zurückgeführt. Die Aktivitäten der bilokulären Enzyme MDH und GOT sind in den Einzelfraktionen nahezu gleich hoch. Die Konzentration an Extraktprotein nimmt von der spezifisch schwersten Fraktion zur leichtesten hin um ca. 80% ab. Die Abnahme der Dichte geht parallel mit einer Abnahme der osmotischen Resistenz der Zellen aus den Einzelfraktionen.

Summary

Human blood platelets were separated into four fractions of different specific gravities by centrifugation in Ficoll density gradients. The total populations and the different fractions were examined on their content of proteins and the activities of the following enzymes: Lactatedehydrogenase (LDH), Malatedehydrogenase (MDH), Glucose-6-phosphatedehydrogenase (G-6-PDH), Aspartateaminotransferase (GOT), Pyruvatekinase (PK), Phosphoglucoseisomerase (PGI). Enzyme activities in the different fractions are constantly higher than in the total population. The activities of LDH, G-6-PDH, PK and PGI show a decrease by 27 to 48% from the heavy to the light fractions. This decrease is attributed to the ageing of platelets in vivo because there is evidence that the heavy fractions consist of young platelets, whereas the light fractions consist of older cells. The concentration of extractable proteins decreases by 80% from the heavy to the light fractions. The heavy young cells are more resistent to osmotic shock than the light old cells.