Determination of lipoic acid in meat of commercial quality

Zusammenfassung

Es wurde eine empfindliche GC/MS-Methode zur Bestimmung des Liponsäuregehaltes in tierischem Gewebe entwickelt. Vor der Extraktion muß zunächst die am Protein gebundene Liponsäure von derε-Aminogruppe des Lysins abgespalten werden. Hierfür wurde die Hydrolyse mit verschiedenen organischen und anorganischen Säuren sowie proteolytischen Enzymen am synthetisierten Molekülε-Lipoyllysin getestet und optimiert. Die Veränderung derε-Lipoyllysin- und Liponsäurekonzentration wurde dabei mittels HPLC verfolgt. Die besten Ergebnisse lieferte die siebenstündige Hydrolyse in 2 mol H₂SO₄ bei 120 °C. Nach der Hydrolyse wurde die Liponsäure durch eine Diethylether/Natriumhydrogencarbonat/Diethylether-Extraktion isoliert und anschließend mit MBDSTFA für die gaschromatographische Untersuchung derivatisiert. Die höchsten Liponsäuregehalte in handelsüblichen Fleischproben konnten in Leber, Herz und Niere ermittelt werden, während in normalem Muskelgewebe die Gehalte niedriger lagen.

Abstract

For the quantitative determination of lipoic acid in meat a sensitive GC/MS method in the chemical ionisation mode with methane as reactant gas has been developed. Firstly, the cleavage of protein-bound lipoic acid from theε-amino group of lysine residues was optimized by hydrolysing the synthesized model compoundε-lipoyllysine with several organic and inorganic acids and proteolytic enzymes. The concentrations of lipoyllysine and lipoic acid during this test hydrolysis were monitored by HPLC. Optimum hydrolytic conditions were heating at 120° C in 2 mol H₂SO₄ for seven hours. After tissue hydrolysis, the lipoic acid in the hydrolysate was separated by a diethylether/sodium bicarbonate/diethylether extraction and then derivatised for GC with MBDSTFA. The highest amounts of lipoic acid in meat of commercial quality were detected in liver, heart and kidney whereas in muscle tissues its content was lower.