Zusammenfassung
Beschrieben wird die Isolierung des schwangerschaftsspezifischen β1-Glykoproteins (SP1) des Menschen und antigenverwandter Proteine einiger subhumaner Primaten (Schimpanse, Rhesusaffe, Cynomolgus und Pavian) mittels Immunadsorption. Die Immunglobuline eines Anti-Human-SP1-Kaninchenserums wurden an DEAE-Zel-lulose abgetrennt und mit Bromcyan-aktivierter Sepharose kovalent verknüpft. An dieses Immunadsorbens wurde SP1 bzw. die mit SP1 verwandten Proteine von Affen aus geeigneten Plazentaextrakt-Fraktionen gebunden. Nach gründlichem Waschen des Adsorbens erfolgte Elution der Proteine mit einem sauren Glycinpuffer. Unspezifisch gebundene Begleitproteine wurden durch Chromatographie an Hydroxylapatit entfernt. Mit dieser Methode erhält man SP1 und die antigenverwandten Proteine der Affen in guter Ausbeute und in hochgereinigter Form.
Die so gewonnenen Proteine werden in ihren physikalisch-chemischen und immunchemischen Eigenschaften miteinander verglichen. Vom Human-SP1 und Rhesus-SP1 werden die Ergebnisse einer Aminosäuren- und Kohlenhydratanalyse mitgeteilt. Biologische Tests zeigten, daß SP1 eine gewisse inhibitorische Wirkung auf die gemischte Leukozytenkultur (MLC) besitzt.
Summary
Purification of human pregnancy-specific β1-glycoprotein (SP1) and antigenically related proteins of sub-human primates (chimpanzee, rhesus monkey, cynomolgus and baboon) was achieved by means of an immunoadsorbent technique. The immunoglobulins of a rabbit antiserum to human SP1 were isolated on DEAE-cellulose and coupled to CNBr-activated Sepharose. This immunoadsorbent was used to bind human SP1, respectively monkey proteins immunochemically related to SP1 from placental extract fractions. After extensive washing the proteins were eluted by an acidic glycine buffer. Contaminating serum proteins could be removed by chromatography on hydroxyapatite columns. With this method it was possible to obtain SP1 and the antigenically related proteins of monkeys in good yield and in highly purified form.
The proteins thus isolated from human and sub-human primate placentae were compared in their physicochemical and immunochemical properties. The amino acid and carbohydrate compositions of human SP, and rhesus SP, have been determined. In a biological test certain inhibitory effect of human SP, on the mixed leukozyte culture (MLC) could be demonstrated.
This is a preview of subscription content, log in via an institution to check access.
Literatur
Bohn H.: Nachweis und Charakterisierung von Schwangerschaftsproteinen in der menschlichen Plazenta, sowie ihre quantitative immunologische Bestimmung im Serum schwangerer Frauen.Arch. Gynäk. 210, 440 (1971).
Bohn H.: Isolierung und Charakterisierung des schwangerschaftsspezifischen β1-Glykoproteins.Blut 24, 292 (1972).
Bohn H.: Untersuchungen über das schwangerschaftspezifische β1-Glykoprotein (SP1).Arch. Gynäk. 216, 347 (1974).
Bohn H. & Ronneberger H.: Immunologischer Nachweis von Schwangerschaftsproteinen des Menschen im Serum trächtiger Tiere.Arch. Gynäk. 215, 277 (1973).
Bohn H. & Sedlacek H.: Eine vergleichende Untersuchung von Plazentaspezifischen Proteinen bei Mensch und subhumanen Primaten.Arch. Gynäk., im Druck.
du Bois M. J., Huismans D. R., Schellekens P. T. A. & Eijsvoogel V. P.: Investigation and standardization of the conditions for microlymphocyte cultures. Tissue Antigens3, 402 (1973).
Clarke M. H. G. & Freeman T.: Quantitative immunoelectrophoresis of human serum proteins.Clin. Sci. 35, 403 (1968).
Contractor S. F. & Davies H.: Effect of human chorionic somatomammotrophin and human chorionic gonadotrophin on phytohaemagglutinin-induced lymphocyte transformation.Nature (New Biol.)243, 284 (1973).
Edelhoch H.: Spectroscopic determination of tryptophan and tyrosine in proteins.Biochemistry 6, 1948 (1967).
Huddleston J. F., Lee G. & Robinson J. C.: Electrophoretic characterization of glucose dehydrogenase,β-glucuronidase, and N-acetyl-β-glucosaminidase from placenta and gestational serum.Am J. Obstet. Gynec. 109, 1017 (1971).
Johannsen R., Carlson A. B., Haupt H. & Heide K.: Human-Blutproteine mit Hemmwirkung auf die Lymphozytentransformation in vitro.Behring Inst. Mitteil. 54, 33 (1974).
Johannsen R. et al.: Hemmung der Lymphozytentransformation in vitro durch Proteine: Aussagekraft und Problematik. In Vorbereitung.
Jones D. D., Williams G. F. & Prochazka B.: Source of the pregnancy serum N-acetyl-β-glucosaminidase isoenzym during human pregnancy.Enzyme 20, 129 (1975).
Lin T. M., Halbert S. P., Kiefer D., Spellacy W. N. & Gall S.: Characterization of four human pregnancy-associated plasma proteins.Am. J. Obstet. Gynec. 118, 223 (1974).
Moore S.: On the determination of cystine as cysteic acid.J. Biol. Chem. 238, 235 (1963).
Moore S., Spackman D. H. & Stein W.: Chromatography of Amino acids on sulfonated polystyrene resins.Anal. Chem. 30 (1958) 1185.
Schellekens P. T. A. & Eijsvoogel V. P.: Lymphocyte transformation in vitro. I. Tissue culture conditions and quantitative measurements.Clin. exp. Immunol. 31, 571 (1968).
Schultze H. E., Schmidtberger R. & Haupt H.: Untersuchungen über die gebundenen Kohlenhydrate in isolierten Plasmaproteinen.Biochem. Z. 329, 490 (1958).
Weiner A. M., Platt T. & Weber K.: Amino-terminal sequence analysis of proteins purified on a nanomole scale by gel electrophoresis.J. Biol. Chem. 247, 3242 (1972).
Zwisler O. & Biel H.: Elektrophorese in horizontalem Polyacrylamidgel.Z. klin. Chem. 4, 58 (1966).
Author information
Authors and Affiliations
Rights and permissions
About this article
Cite this article
Bohn, H., Schmidtberger, R. & Zilg, H. Isolierung des schwangerschaftsspezifischen β1-Glykoproteins (SP1) und antigenverwandter Proteine durch Immunadsorption. Blut 32, 103–113 (1976). https://doi.org/10.1007/BF00995937
Received:
Issue Date:
DOI: https://doi.org/10.1007/BF00995937