Zur Reinigung von Hühner-Interferon

Zusammenfassung

Interferon wurde aus der Allantois-Flüssigkeit von Hühnerembryos, welche mit Influenza B Lee-Viren infiziert worden waren, etwa 6000fach angereichert. Die Reinigungsmethode umfaßte Fällungen mittels HClO₄ und Zinkacetat, Chromatographie an CM-Sephadex C-25 und Gelfiltration an Biogel P-200. Die erhaltenen Interferon-Präparate zeigten eine spezifische Aktivität von bis zu 200 000 Einheiten je mg Protein. Zum Vergleich wurde dieselbe Reinigungsmethode auch auf die Allantois-Flüssigkeit nicht infizierter Hühnereier angewendet. Das hierbei erhaltene “Mock”-Interferon besaß praktisch keine antivirale Aktivität

Disc-Elektrophoresen in zwei verschiedenen Systemen zeigten, daß die Interferon-Präparate nicht einheitlich waren. Eine Haupt-Proteinkomponente wurde von mehreren Nebenbanden begleitet. Die Interferon-Aktivität fiel mit einer der Nebenkomponenten zusammen. Als jedoch “Mock”-Interferon der Disc-Elektrophorese unterworfen wurde, ergab sich ein Proteinmuster, welches von dem aus Interferon-Präparaten nicht zu unterscheiden war.

Aus diesen Resultaten wurde geschlossen, daß zur Herstellung von reinem Hühner-Interferon eine weitere Erhöhung der spezif. Aktivität um mindestens eine Größenordnung erforderlich wäre.

Abstract

Interferon was purified about 6000 fold from the allantoic fluid of embryonated chicken eggs infected with Influenza B Lee virus. The fractionation procedure involved precipitations with HClO₄ and zinc acetate, chromatography on CM-Sephadex C-25, and gel filtration on Biogel P-200. The interferon preparations obtained exhibited a specific activity of up to 200 000 units per mg of protein. For comparison, the same fractionation procedure was also applied to the allantoic fluid of uninfected chicken eggs, yielding “mock”-interferon virtually devoid of antiviral activity.

Disc electrophoresis in two different systems showed the interferon preparations to be inhomogeneous, a main protein component being accompanied by several minor bands. The antiviral activity coincided with one of the minor protein bands. However, when “mock”-interferon was subjected to disc electrophoresis, a protein pattern indistinguishable from that of the interferon preparations was obtained.

It was concluded from these results that in order to prepare pure chicken interferon a further increase in specific activity by at least one order of magnitude would be required.