Anwendung aviärer vitelliner Antikörper als Sekundärreagenzien

Zusammenfassung

Mit dem Nachweis der Eignung aviärer vitelliner Antikörper (IgY) als Sekundärantikörper in immunologischen Testsystemen wird eine Möglichkeit zum Ersatz von Säugetier-Antikörpern aufgezeigt. Herkömmlich werden Sekundärreagenzien zum Erfassen der verschiedensten Primärantikörper eingesetzt und üblicherweise durch Bluten von größeren Säugetieren (z.B. Ziege, Kaninchen, Schaf) gewonnen. Im Gegensatz zur Antiserumherstellung ist die Isolierung von IgY-Antikörpern aus dem Eidotter möglich. So werden die Versuchstiere nur bei der Immunisierung und nicht bei der Gewinnung der Antikörper Belastungen ausgesetzt. Um eine Akzeptanz als „Ersatz“ für Säugetier-Antikörper zu erreichen, mußte für die aviaren vitellinen Antikörper nachgewiesen werden, daß sie die Anforderungen an Qualität und Quantität ebenso wie mammäre Antikörper erfüllen, d.h. hohe Spezifität, gute Affinität, leichte Markierbarkeit, grosse Ausbeute und lange Haltbarkeit. So konnte mit verschiedenen Anwendungsbeispielen belegt werden, daß HAM-IgM bzw. IgG-Antikörper unmarkiert oder markiert (FITC, Biotin, POD) in immunologischen Testsystemen erfolgreich zu nutzen sind. Voraussetzung für ihren Einsatz waren systematische Untersuchungen von Einzeleiproben unter Beachtung der Antigendosis, der Verwendung von Adjuvans und der Phase der Immunantwort. Darüber hinaus sind Qualitätsproben durchgeführt worden, die belegen, daß sich Huhn-Antikörper ebenso wie Säugetier-Antikörper in immunologischen Testsystemen verhalten. Vorgestellt werden Experimente, bei denen IgY-Präparate als unmarkierte Brückenantikörper in ELISA-Systemen, direkt und indirekt markierte Detektionsantikörper in der Durchflußzytometrie und POD-gekoppelte Nachweisantikörper fur Isotypen und Subklassen von Maus-mAk eingesetzt worden sind.