1-Sekunden-PCR’

Zusammenfassung

Standardisierte PCR-Applikationen verwenden für das Denaturieren und dem Annealing ca. 30 bis 60 Sekunden. Für die Elongation wird i. d. R. eine Minute pro 1000 bp veranschlagt. Bei einer Durchführung von 25–30 PCR-Zyklen sind bis zu drei Stunden für eine PCR-Amplifikation notwendig. Generell lassen sich die PCR-Zeiten dramatisch verkürzen. Im Falle der „1-Sekunden“-PCR werden für die Denaturierung, dem Annealen sowie der Elongation jeweils nur eine Sekunde des entsprechendes Schrittes programmiert (Briggs et al. 1998). Solch ein PCR-Profil weist praktisch keine Stufen mehr auf, das heißt, dass der Thermocycler ausgehend von der Denaturierungstemperatur bei 95 °C direkt auf die Annealing-Temperatur herunterkühlt und anschließend direkt wieder auf 95 °C hoch heizt. Bei Verwendung von Thermocyclern, die Peltierelemente besitzen, lassen sich somit ca. 30 PCR-Zyklen innerhalb von 60 Minuten effektiv durchführen. Im Falle luftgekühlter PCR-Thermocycler wie z. B. der LightCycler (Roche Diagnostic) oder SmartCycler (Cepheid) kann die für 30 Zyklen erforderliche Zeit auf 20 bis 30 Sekunden reduziert werden.