Jasplakinolid ile F-aktin stabilizasyonu uygulanan endotel hücrelerinde difteri toksini trafiği
Bilge Özerman Edis1, Ebru Hacıosmanoğlu2, Başak Varol1, Muhammet Bektaş11İstanbul Üniversitesi, İstanbul Tıp Fakültesi, Biyofizik Ana Bilim Dalı, İstanbul2İstanbul Bilim Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Fizyoloji Ana Bilim Dalı, İstanbul
GİRİŞ ve AMAÇ: Ökaryotik hücrelerde mikrofilament yapısının ana bileşeni olan aktin, sinyal yolaklarını aktin bağlayan proteinlerle etkileşerek düzenler. Daha önceki çalışmalarımızda difteri toksini ve mutant difteri toksini (CRM-197) ile enfekte olan endotel hücrelerinde toksinin A fragmenti ile etkileşen filamentöz aktinin depolimerleştiği saptanmıştır. Bu çalışmada endotel hücrelerinde F-aktin stabilizasyonu sağlanarak Difteri toksininin hücre içi trafiğinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Hücre kültüründe endotel hücreleri çoğaltıldı ve jasplakinolid (0,1 µmol/ml) ile sırasıyla 30 ve 60 dakika uygulandı. Diferi toksini (0,75 nmol/ml) uygulaması için jasplakinolid ile inkübasyon süresi 15 dakika ile sınırlandırıldı. Hücre içi F-aktin stabilizasyonu ve difteri toksini trafiği immünofloresan mikroskopisi ile görüntülendi.
BULGULAR: Bekletme süresine bağlı olarak stres liflerinin jasplakinolid uygulanan endotel hücrelerinin hücre zarında belirginleştiği tespit edildi. F-aktin stabilizasyonu sağlanan endotel hücrelerinde difteri toksini trafiğinin engellenmediği ve A fragmenti’nin perinükleer alana yöneldiği görüntülendi.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Hücre içinde F-aktin stabilizasyonu ile G-aktin/F-aktin dönüşümünün engellenmesi difteri toksini trafiğini durdurmamaktadır. Bu sonuç toksin trafiğinde filamentöz aktinin önemini gösteren çalışmaları desteklemektedir.
F-actin stabilization by jasplakinolide in endothelial cells and diphtheria toxin traffic
Bilge Özerman Edis1, Ebru Hacıosmanoğlu2, Başak Varol1, Muhammet Bektaş11Istanbul University, Istanbul Faculty of Medicine, Department of Biophysics, Istanbul2Istanbul Bilim University, Faculty of Medicine, Department of Physiology, Istanbul
INTRODUCTION: Actin, the main component of microfilament structure in eukaryotic cells, regulates signaling pathways by interacting with actin binding proteins. Previous studies have shown that depolymerization of filamentous actin(F-actin) occurs following fragment A and actin interaction in diphtheria toxin or mutant diphtheria toxin (CRM-197) infected endothelial cells. In this study, it was aimed to determine intracellular trafficking of diphtheria toxin by providing F-actin stabilization in endothelial cells.
METHODS: Human umbilical vein endothelial cells were cultured and incubated with 0.1 μM jasplakinolide for 30 and 60 minutes respectively. For diphtheria toxin (0.75 nM) treatment, the incubation time with jasplakinolide was limited to 15 minutes. Intracellular F-actin stabilization and diphtheria toxin traffic were visualized by immunofluorescence microscopy.
RESULTS: Depending on the duration of the incubation period, it was determined that the stress fibers were expressed in the cell membrane of the endothelial cells treated with jasplakinolide. It was shown that diphtheria toxin trafficking was not inhibited in F-actin-stabilized endothelial cells and Fragment A was directed to the perinuclear area.
DISCUSSION AND CONCLUSION: Inhibition of G-actin / F-actin steady state turn-over by F-actin stabilization in the cell does not stop diphtheria toxin trafficking. This result supports studies showing the importance of filamentous actin in toxin trafficking.
Sorumlu Yazar: Bilge Özerman Edis, Türkiye
| ARAÇLAR |
 Tam Metin PDF Yazdır Alıntıyı İndir RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager E-Postala Paylaş Yazara e-posta gönder
Benzer makaleler Google Scholar |