Identifikace auxotrofních kmenůEscherichia coli metodou vpichů do zivné půdy

Vypracovali a ověřili jsme novou metodu isolace auxotrofních kmenů bakterií. Metoda je téz vhodná pro kvalitativní zjišťování nároků isolovaných auxotrofních kmenů na doplňky výzivy. Metoda je zalozena na srovnávací kultivaci zkoušených kolonií očkovaných vpichem do agarové obohacené a minimální zivné půdy. Pomocí tohoto postupu jsme isolovali z buněčných suspensíEsch. coli ozářených UV světlem auxotrofní kmeny vyzadující methionin a jiné slozky enzymatického hydrolysátu kaseinu. Metodu lze výhodně kombinovat s dosud známými postupy pouzivanými k uvedeným účelům.

При изоляции ауксотр офных штаммов бактер ий пенициллиновым мето дом или методом дополнительного или ограничительного до бавления питательных веществ нередко бывает необходимо проверит ь свойства нескольки х десятков и даже нескольких соте н колоний и узнать, действитель но ли речь идет об аукс отрофных штаммах. Для облегчен ия этих испытаний можно инокулировать питательную среду ук олом бактериологической иглой. Установлено, что при этом способе и нокуляции количеств о переносимых питател ьных и посевных веществ так ничтожно, что оно не позволяет р асти ауксотрофным штамма м, если посев производ ится из среды, содержащей о бычные концентрации дополнительных пита тельных веществ, в которых нуждаются а уксотрофные штаммы. П ри посеве из среды, содержащей чрезвычайно большие (тысячекратные и боле е) концентрации дополн ительных питательны х веществ, может наблюд аться медленный рост ауксотрофных колони й на минимальной сред е. Такие колонии отлича ются от остальных, неауксотрофных, коло ний несколько меньши ми размерами, но в этом сл учае бывает трудно от личить эти колонии от остальных. При исследовании особенностей большо го числа штаммов можн о сочетать этот метод с методом о тпечатков. С помощью уколов в пит ательную среду можно также качественно определ ять требования выделенных ауксотро фных штаммов к дополн ительным питательным веществ ам. Метод удобен и для изучения требований к весьма д ейственным веществам, как, напр., к витамину B₁₂. Установлено, что даже появление реверсий к исходной культуре не мешает ра спознаванию ауксотрофных штаммо в с помощью метода уко лов в питательную среду. Эт им методом в отдельно сти и в сочетании с другим и методами были выдел ены ауксотрофные штаммы Escherichia coli, требующие наличия ме тионина и других сост авных частей энзиматическ ого гидролизата казеина.

When isolating auxotrophic strains of bacteria by the penicillin method or by the method of delayed (layer plating) and limited enrichment of the minimal medium by nutrients, it is often necessary to test the properties of several tens or hundreds of colonies to verify whether they are actually auxotrophs. These tests are simplified by inoculating the minimal medium with stab cultures. It was found that the amount of nutrients and inoculum transferred by this inoculation method is so small that auxotrophic colonies are unable to grow when inoculated from media containing the usual concentrations of supplementary nutrients required by auxotrophs. If the inocula are taken from media containing exceptionally high (thousandfold and higher) concentrations of supplementary nutrients, i. e. more than required for complete growth of the auxotrophs, slow growth of auxotrophic colonies begins on the minimal medium. These colonies differ from other auxotrophic colonies by their slightly smaller size, but are otherwise difficult to distinguish from them. If the properties of a large number of strains are tested, this method can be combined with the replica plating method. The nutritional requirements of auxotrophic strains can be determined by stab culture. This method is likewise suitable for ascertaining their needs as regards particularly effective substances, e. g. vitamin B₁₂. It was found that even reversion of auxotrophic strains to the original maternal culture did not impede the identification of auxotrophic strains by the stab culture method. By using this method, and combining it with other isolation methods, auxotrophic strains ofEscherichia coli were isolated, requiring methionine and other compounds of enzymatic casein hydrolysate.

Authors and Affiliations

1. Katedra mikrobiologie, Přírodovědecká fakulta university v Brně, Czechoslovakia

   Bohumír Liška & Theodor Martinec

Reprints and permissions