Méthode de clonage des cellules de drosophile. Sensibilité aux rayons X de plusieurs lignées cellulaires

Summary

• 1. The sensitivity to X-rays of 5 differentDrosophila cell lines has been studied. Statistical analysis of experimental data for doses between 10,000 and 16,000 roentgen showed that, for each cell line, the probability of survial of each cell is independent. According to the relationship observed between the dose and the survival frequency, the five lines studied can be classified into 3 groups. Moreover, the cell population of each line is heterogeneous with respect to radiosensitivity, some cells being more radioresistant than others.

• 2. UnirradiatedDrosophila cells seeded at a very low multiplicity are unable to multiply unless they are cultured among heavily irradiated cells. Each cell has an independant probability of initiating a clone. This probability,p, is different for each one of the 3 cell lines examined:p ₁=0.69,p ₃=0.35,p ₆=0.02.

  These differences are likely to have a genetic origin.

• 3. The ability of a single cell to initiate a clone, when cultured among cells whose multiplication has been stopped by X ray irradiation, provides a simple and efficient cloning method. The conditions in which a given cell line could be cloned were defined after determination of the dose-survival relationship and estimation ofp.

The cloning procedure is described. The homogeneity of the karyotype and cell morphology can be used to monitor the homogeneity of the cell population.

Résumé

• 1. Une étude de la sensibilité aux rayons X des cellules de Drosophile de 5 lignées différentes, cultivées in vitro a été effectuée.

  L'analyse statistique des données expérimentales obtenues pour des doses comprises entre 10000 et 16000 roentgen, montre que pour chaque lignée, les cellules sont indépendantes dans leur probabilité de survie. L'étude de la variation de la fréquence de survie en fonction de la dose permet de classer les 5 lignées en 3 groupes. De plus, chaque lignée cellulaire est hétérogène et contient une fraction de cellules plus radiorésistantes.

• 2. Des cellules de Drosophile, ensemencées en très petit nombre, ne sont capables de se multiplier que lorsqu'elles sont mises en présence de cellules fortement irradiées. Elles sont indépendantes dans leur probabilité de reprise (ou probabilité pour une cellule de former un clone). Chacune des 3 lignées étudiées est caractérisée par une valeur particulière de sa probabilité de reprise:p ₁=0.69,p ₃=0.35,p ₆=0.02.

  Les différences observées sont probablement de nature génétique.

• 3. La capacité d'une cellule de donner un clone, lorsqu'elle est mise en culture en présence de cellules dont la multiplication est stoppée par une irradiation aux rayons X, a permis de mettre au point une méthode de clonage simple et efficace. Les conditions dans lesquelles doit être effectué le clonage d'une lignée sont définies d'une part, après étude de la fréquence de survie en fonction de la dose d'irradiation et d'autre part, après estimation de la valeur caractéristique de la probabilité de reprise de la lignée. Les différentes opérations que comporte le clonage sont décrites. Deux critères simples permettent de contrôler l'homogénéité des populations cellulaires isolées dans ces conditions: le caryotype et la morphologie.